李芳婵,韦红勤,陈 清,罗宇东,庞晓云,黄 菁,王苏妃
(1.广西中医药大学,南宁 530200;2.广西壮瑶药工程技术研究中心,南宁 530200;3.广西中医药大学制药厂,南宁 530000)
根据世界卫生组织(WHO)数据统计显示,高血脂症是全球五大致死病因之一,容易引发心脑血管疾病,严重威胁人们的身体健康[1]。五味祛脂颗粒配方是根据中国“药食同源”传统饮食文化和壮瑶药用药理论组方拟开发的具有辅助降血脂功效的保健食品,由藤茶、葛根、决明子、百合、荷叶等药食同源的药材组方。本试验通过建立高血脂症大鼠模型,观察五味祛脂颗粒对高血脂大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、甘油三酯含量的影响,以期为五味祛脂颗粒的进一步开发提供理论依据。
高脂饲料按《关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法的通知》国食药监保化[2012]107号配制,配方:维持饲料49.3%、蔗糖20%、猪油15%、酪蛋白12.5%、胆固醇1.2%、磷酸氢钙1.3%、石粉0.5%、胆酸钠0.2%。维持饲料(北京科澳协力饲料有限公司生产),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒(南京建成生物工程研究所,生产批号20181129)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒(南京建成生物工程研究所,生产批号20181116)、总胆固醇(TC)试剂盒(南京建成生物工程研究所,生产批号20181129)、甘油三酯(TG)试剂盒(南京建成生物工程研究所,生产批号20181116)。
5810R高速冷冻离心机(德国艾本德公司)、EPOCH全波长酶标仪(美国BIOTEK公司)
健康雄性SD大鼠(SPF级),体重(150±10)g,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,生产许可证:SCXK(湘)2016-0002,质量合格证:No.4300470 0040620。
1.4.1 五味祛脂颗粒的制备 按比例称取藤茶、葛根、决明子、百合、荷叶药材,加10倍量水提取2次,每次1.5 h,过滤浓缩至稠膏,加糖粉、甜菊苷、淀粉等辅料制成。
1.4.2 造模 取SPF级健康雄性SD大鼠98只,适应性喂养维持饲料5 d后,按体重随机分为空白对照组(8只)和模型组(90只)。模型组给予高脂饲料,空白对照组给予维持饲料,饲喂14 d后,大鼠不禁食眼内眦采血,迅速分离血清,用试剂盒测定大鼠血清的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量。模型组与空白对照组比较,血清甘油三酯升高,血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇升高,差异均有显著性,判定高脂血症大鼠模型成立。
1.4.3 给药 取上述高脂血症模型大鼠40只,根据TC水平将模型组分为模型对照组、阳性组、高剂量组、中剂量组、低剂量组共5组,每组8只。五味祛脂颗粒低、中、高剂量组剂量分别为7.08、14.17、21.25 g/kg(按生药量算,相当于人体剂量的5、10、15倍),以非诺贝特组为阳性药,剂量为100 mg/kg。各组每次按照15 mL/kg灌胃给予相应的受试物,空白对照组灌胃给予相同剂量的生理盐水,模型对照组灌胃给予相同剂量的去离子水,每日1次,连续给样30 d。给样期间,空白对照组继续饲喂维持饲料,模型对照组及各剂量组饲喂高脂饲料。每3 d记录动物体重1次,并根据体重调整给样量。末次给样后,大鼠不禁食眼内眦采血,迅速分离血清,用试剂盒测定大鼠血清中HDL-C、LDL-C、TC、TG含量。分组、给药剂量、给药体积及给药次数具体见表1。
表1 五味祛脂颗粒各剂量组给药剂量、给药体积、给药次数
1.4.4 检测指标 末次给药后,收集大鼠血液至离心管,4℃冰箱放置1 h,3 000 r/min离心15 min,取血清,按照HDL-C、LDL-C、TC、TG试剂盒检测要求,检测血清中HDL-C、LDL-C、TC、TG含量。
根据《关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法的通知》(国食药监保化[2012]107号)中辅助降血脂功能检验方法判断辅助降血脂功能动物试验结果。
模型组与空白对照组比较,血清甘油三酯升高,血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇升高,差异均有显著性,判定高脂血症大鼠模型成立。
各剂量组与模型对照组比较,任一剂量组血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇降低,且任一剂量组血清甘油三酯降低,差异均有显著性,同时各剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于模型对照组,可判定该受试样品辅助降低血脂功能试验结果阳性。
各剂量组与模型对照组比较,任一剂量组的血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇降低,差异均有显著性,同时各剂量组的血清甘油三酯不显著高于模型对照组,各剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于模型对照组,则可判定该受试样品辅助降低胆固醇功能试验结果阳性。
各剂量组与模型对照组比较,任一剂量组血清甘油三酯降低,差异均有显著性,同时各个剂量组低密度脂蛋白胆固醇及总胆固醇不显著高于模型对照组,血清高密度脂蛋白不显著低于模型对照组,则可判定该受试样品辅助降低甘油三酯功能动物试验结果阳性。
采用SPSS 17.0统计软件处理,数据以平均数±标准差(xˉ±s)表示,先用Leven′s test方法进行方差齐性检验,如果符合方差齐性,则采用单因素方差分析(ANOVA)和post HocLSD进行多个试验组均数间的两两比较。如若方差不齐,则用T检验进行统计分析。P<0.05表示差异有显著意义,P<0.01表示差异有极显著意义。
从表2可以看出,饲喂高脂饲料14 d后,与空白对照组比较,模型组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)均极显著升高(P<0.01),判定高脂血症大鼠模型成立。按总胆固醇(TC)含量将模型组分为高、中、低剂量组、非诺贝特组及模型对照组,模型对照组及各给药组大鼠血清TC、TG均极显著高于空白对照组(P<0.01),LDL-C与空白组比较,无显著差异(P>0.05),HDL-C与空白组比较,无显著差异(P>0.05),各给药组血清TC、TG、LDL-C、HDL-C与模型对照组比较,无显著差异(P>0.05)。
表2 给予高脂饲料14 d后大鼠分组血脂数据(单位:mmol/L)
从表3可以看出,与空白对照组比较,模型对照组、五味祛脂颗粒各剂量组大鼠初始体重差异无显著性,模型组大鼠终末体重增加,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组比较,五味祛脂颗粒各剂量组动物终末体重降低,差异有统计学意义(P<0.01),表明在本试验条件下五味祛脂颗粒对大鼠体重有明显影响,五味祛脂颗粒可减缓高血脂模型大鼠体重的增长,可能具有一定的减肥功效。
表3 五味祛脂颗粒对大鼠体重的影响
从表4可以看出,末次给药后,模型对照组大鼠的血清TC、TG、LDL-C含量均极显著高于空白对照组(P<0.01),HDL-C含量极显著低于空白对照组(P<0.01)。与模型对照组比较,五味祛脂颗粒各剂量组TC、TG、LDL-C随剂量增加而降低,中剂量组、高剂量组有显著(或极显著)差异(P<0.05或P<0.01),低剂量组也能够显著降低TG含量(P<0.05);五味祛脂颗粒各剂量组的HDL-C含量与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。根据《关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法的通知》(国食药监保化[2012]107号)中辅助降血脂功能检验方法,判断五味祛脂颗粒具有辅助降血脂功能。
表4 末次给药后五味祛脂颗粒对大鼠血脂含量的影响(单位:mmol/L)
高血脂症是指人体的血脂紊乱或血脂异常,包括总胆固醇含量升高、甘油三酯含量升高、低密度脂蛋白含量升高,以及高密度脂蛋白含量下降等,会诱发冠心病、脑中风、高血压、高血糖等严重疾病[2,3]。目前高血脂症主要应用化学药物治疗,包括他汀类、贝特类、依折麦布、胆酸螯合剂等,这些临床治疗效果明显,但作用靶点单一,容易引起不良反应;而中药在高血脂的治疗方面历史悠久,安全性高,多靶点,价格低廉,且可多方联合应用,标本兼治[4,5],因此备受关注。
五味祛脂颗粒由藤茶、葛根、决明子、荷叶、百合等药食同源中药组方,具有利湿平肝、清热解暑、活血通络的功效。藤茶可以通过降低血管渗透性和脆性来保护血管免受细胞被氧化损害引起的伤害,而抑制高脂血症的形成,具有降脂及治疗非酒精性脂肪性肝病的作用[6-10]。葛根可以降低食源性高脂血症大鼠的血脂水平,降低脂质过氧化程度,提高机体的抗氧化能力,可防治动脉粥样硬化和减少心脑血管疾病的发生,葛根素能有效降低大鼠血清中甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白,而明显升高HDL含量和HDL-C/TC比,具有明显的降脂作用[11-13]。决明子中橙黄决明素具有降血脂活性,且其活性与普伐他汀相当[14-16]。荷叶具有降脂减肥、抗氧化及衰老、抗炎抑菌、镇静安神抗疲劳等药理活性[17,18]。百合有助于改善亚健康人群的健康状态[19,20]。
研究表明血清中TC、TG、LDL-C含量的升高和HDL-C含量的降低更容易诱发动脉粥样硬化和心脑血管疾病,LDL-C是将肝脏合成的胆固醇转运到全身组织的主要形式。试验结果表明,五味祛脂颗粒能够降低高血脂模型大鼠血清中TC、TG、LDL-C的含量,具有辅助降血脂作用,可为后续的开发和产业化应用提供一定的理论依据。
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