一例罕见HBsAg胶体金法假阴性的处理分析
作者 | 谭明芳
单位 | 广西壮族自治区脑科医院 检验科
前 言
目前用于乙肝病毒血清学检测的方法常用的有胶体金法、酶联法（ELISA法）、化学发光法(CLIA法）以及可用于检测乙肝病毒载量的乙肝病毒DNA检测（PCR法）四种，前两者可进行定性检测，CLIA法可进行定量检测，而PCR法则可反应体内的病毒复制情况和治疗效果监测。每种方法都有各自的优点和缺点，在遇到特殊情况时需要用其他方法进行验证后方可发出检验报告。
案例经过
患者，男，84岁，因腹胀1周入院，既往史：有“脑梗死个人史、急性十二指肠溃疡不伴有出血和穿孔、不完全性肠梗阻、高血压3级、睡眠障碍、腰椎间盘突出”病史，有腰椎手术史，具体不详。否认糖尿病、冠心病病史，否认肝炎、肺结核等传染病病史，否认重大外伤史，否认输血史，有"头孢菌素"过敏史，否认食物过敏史。
入院时查体：T36.5℃,P81次／分，R20次／分，BP124/75mmHg，神清，正常面容，两肺呼吸音清，未闻及干湿性啰音。腹平软，剑突下深压痛，无反跳痛，肝脾肋下未及，肝肾区无叩痛。
辅助检查：CLIA法检测HBsAg：＞250IU/mL，为阳性反应，如图1，其他未见明显异常。
图1
按要求，首次HBsAg阳性的需要进行复检，我们用胶体金法复查后结果为阴性反应，结果与CLIA法不符合。我们重新用CLIA法检测该样本的乙肝两对半，结果为1235阳性，如图2。
图2
为排除HBsAg胶体金法的钩状效应，我们对血清样本进行1:2、1:5、1:10、1:20、1:40和1:80稀释后再检测，结果均为阴性反应，如图3。
图3
同时，我们与临床医生沟通建议加做乙肝病毒DNA检测，结果提示该样本存在乙肝病毒载量，结果为5.06E+06IU/ml，如图4。
图4
至此，我们可以确定是该胶体金法出现了假阴性现象。为了找出原因，我们联系了试剂公司的售后，由工程师来我院取血清样本和该盒试剂回公司进行验证，验证结果显示该盒试剂有效，符合国家标准。
同时也验证了该样本的该胶体金法发生了假阴性现象，其原因分析可能是个别样本中存在干扰物质，对于不同平台、不同方法学以及不同原料的产品产生不同程度的干扰而导致检测差异，如图5；其上送第三方杭州金域医学检验检测的HBsAg结果是阳性反应，为67.5IU/ml，如图6。
图5
图6
案例分析
假阴性现象的发生在医学检验工作中是并不少见，而且有些也很难避免，从庄岳鹏，庄秋萍老师的研究我们可以看到，HBsAg血清学检测假阴性现象的发生不单只是发生在胶体金法上，其它方法学也同样存在，而且有很多原因。
有人为主观因素，如标本的采集、分离与保存方式是否正确，加样量、加样位置是否正确，孵育的温度、时间和方式是否准确，洗板方式、结果判读方式是否正确等，任何一环节的操作不当或失误都会影响到检测结果的准确性，如杨玲老师的研究也说明了特殊样本处理不好就有可能导致假阴性现象的发生。
客观因素也有很多，如方法学因素、试剂因素、病毒亚型、病毒变异、钩状效应和样本中免疫复合物的存在等等。
乙肝病毒可分为A-H共8个基因型，我国主要以B和C型为主，其中南方以B型为主，北方以C型为主，A和D型散在分布，不同方法学或者相同方法学不同厂家的试剂所包被的基因片段在针对不同亚型的检测灵敏度和特异性并非完全一致，或多或少也会存在假阴性现象的发生。
该病例的HBsAg在CLIA法检测超过上限值的情况下发生胶体金法假阴性现象比较罕见，因此我们遇到这种情况一定要特别注意，首先要排除人为因素导致的，因此要核对样本信息后按标准操作流程重新用CLIA法检测该样本，确定样本无误后再排除胶体金法是否发生钩状效应，因此需要对样本进行相应的稀释后再进行检测。
当然还需要对该盒试剂进行质量和有效性的验证，以排除试剂问题，最后才能确定是样本本身的原因导致了假阴性现象的发生，至于是病毒亚型、病毒变异还是存在免疫复合物的干扰，由于条件有限，我们没办法开展基因分型工作，厂家的反馈是该样本可能存在某些干扰物质导致的差异接结果。
总 结
乙肝病毒的血清学检测有多种方法，每种方法都有各自的优点和缺点，我们检验人要了解不同检测方法的检测原理、检测范围和影响因素，以排除不同检测方法产生的假阳性或假阴性现象，提高实验室报告的准确性，更好的服务临床。
专家点评
（李永洋，广西壮族自治区脑科医院检验科主任）
该病例发生罕见的HBsAg胶体金法假阴性现象给我们检验人敲响了警钟，因此在日常工作中，遇到不符合的情况时要从检验质量管理体系的人机料法环当中查找原因并做相应的处理，防止发出不符合的检验报告，避免由此产生的医疗风险和医疗纠纷。
参考文献
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[7]杨玲.高凝致酶联免疫法测乙肝表面抗原假阴性1例[J]中国社区医师，2019,36（16）:86
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编辑：徐少卿 审校：陈雪礼
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