一种检测贝那鲁肽的分析方法及其血浆样品处理方法与流程
本申请涉及检测领域，具体涉及检测体内贝那鲁肽（beinaglutide）的新型分析方法及其血浆样品处理方法。
背景技术：
1、糖尿病是全世界范围内的慢性疾病，glp-1类药物作为降糖减肥的重要药物类别，近年来备受关注并取得了显著的发展。目前，针对glp-1受体为靶点的药物开发已成为降糖药物研究的主流，大多药物为国外研发。仁会生物历经十七年研发，获批上市了中国糖尿病领域内的第一个创新药，贝那鲁肽注射液（商品名“谊生泰”），该药也是全球目前首个且唯一的全人源glp-1类药物，长期使用不易产生抗体，产品安全性更高。贝那鲁肽的氨基酸序列与人体内glp-1相同，正是由于二者的氨基酸序列完全相同，因此在进行药代动力学样品分析时，想要准确定量贝那鲁肽药物的血药浓度面临着挑战，即如果要区分内源性glp-1物质和贝那鲁肽药物，存在着一定的难度。
2、与传统药物相比，glp-1类药物属于生物技术药物，在进行药代动力学研究时，这类药物与小分子药物不同，容易受到内源性物质的干扰，进而影响检测结果的准确性。因此，常规的检测方法在分析这类药物时，在特异性、灵敏度和准确度上都面临着挑战。由于是生物药物，一般在检测时会首先选择免疫方法学，即利用抗原抗体特异性结合来检测目标药物，该方法灵敏度非常高，但是容易受到内源性类似物及其代谢物的干扰。针对本申请的贝那鲁肽，目前的检测方法是采用酶联免疫（elisa）法进行血药浓度检测。由于该药物的氨基酸序列和人体内的glp-1完全一致，也就意味着elisa方法肯定会受到内源性物质的干扰。因此进行贝那鲁肽药物定量时，需要先定量空白基质中glp-1的基线浓度，然后测定给药后glp-1+贝那鲁肽药物的总浓度，通过总浓度减去空白基线的浓度来评估贝那鲁肽的pk曲线。由于引入了2次计算，因此给贝那鲁肽的绝对定量也带来了不确定性因素。同时elisa方法所用试剂盒也比较昂贵，由于受内源性干扰，方法重现性上也存在一定的风险。
技术实现思路
1、本申请充分利用了液质联用仪器的优势，一方面使得内源性的glp-1与贝那鲁肽药物实现了分离，同时又经过前处理方法以及所有试剂和耗材的优化，以及质谱仪器的信号优化，使得该方法达到了elisa方法学的灵敏度，甚至更优一些。
2、为了有效地检测贝那鲁肽的血液浓度，本申请提供了如下实施方案：
3、在第一方面，本申请提供了一种用于检测贝那鲁肽的血浆样品预处理方法，其包括：
4、a)在含有贝那鲁肽的血浆样品中加入内标；
5、b)在步骤a)的血浆样品中加入提取溶液进行沉淀，并取上清液；以及
6、c)对步骤b)获得的上清液进行固相萃取，以获得用于检测的血浆样品，其中所述内标为exendin-4。
7、在第二方面，本申请提供了一种用于检测贝那鲁肽的方法，其包括：
8、a)提供通过第一方面所述的方法获得的血浆样品；
9、b)通过lc-ms/ms分析测量所述血浆样品中贝那鲁肽的浓度。
10、本申请的技术建立了一种准确可靠的检测血基质中贝那鲁肽的新型分析方法。本技术的优势包括以下的至少一项：
11、1、特异性好，能够解决内源性glp-1的干扰问题；
12、2、稳健且重现性好，检测成本低；
13、3、灵敏度高，满足临床项目检测要求。
技术特征：
1.一种用于检测贝那鲁肽的血浆样品预处理方法，其包括：
2.如权利要求1所述的方法，其中所述固相萃取利用固相萃取(spe)板进行，并且所述固相萃取板为oasis max。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述固相萃取采用淋洗液除去多余物质，并且采用洗脱液将贝那鲁肽洗脱下来。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述淋洗液为超纯水和/或体积比为10：90的甲醇：超纯水。
5.如权利要求1或2所述的方法，其中所述血浆样品是冷冻保藏的，并且所述血浆样品被反复冻融不超过3次。
6.如权利要求1或2所述的方法，其中所述提取溶液为体积比为50：50：0.1的乙腈：甲醇：氨水。
7.一种用于检测贝那鲁肽的方法，其包括：
8. 如权利要求7所述的方法，其中所述lc-ms/ms分析采用waters，ace excel 3 aq，4.6×50 mm色谱柱。
9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述lc-ms/ms分析采用质谱离子对660.800→752.200进行。
10.如权利要求7或8所述的方法，其中在所述lc-ms/ms分析中，流动相包括a相和b相，a相为超纯水并且b相为体积比为1000：0.5的乙腈：甲酸。
技术总结
本申请涉及一种用于检测贝那鲁肽的方法及其血浆样品处理方法。本申请通过优化不同液质联用仪、液质条件、色谱柱以及前处理的方法，建立了一种高灵敏度、高特异性、高通量且稳定可靠的液相色谱串联质谱(LC‑MS/MS)法，定量检测血浆基质中贝那鲁肽的浓度。
技术研发人员：张怀敬,高丹娜,王雪莉
受保护的技术使用者：军科正源（北京）药物研究有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/8/13
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