黑豆几丁质酶的纯化及其生物学活性研究
黑豆几丁质酶的纯化及其生物学活性研究
【摘要】：植物几丁质酶是植物体中能够水解几丁质多聚体的一种致病性相关蛋白(Pathogenesis-related proteins),是植物体中与防御有关的一种次生水解酶。主要水解几丁质多聚体中的β-1,4-糖苷键,生成N-乙酰氨基葡萄糖寡聚体或单体。大多数酶的分子量为25-40 k D,最适p H值为6,多数以单体形式存在,50℃仍很稳定。由于其具有显著的抗病虫害和抗真菌活性,近年来几丁质酶已经成为工业、农业、生物技术以及食品等领域研究的热点。黑豆是众所周知的健康食品,但是对于黑豆中几丁质酶的研究却很少,随着人们对于黑豆研究的逐步加深,黑豆在食品、保健等各方面的应用会更加广泛,对黑豆中的几丁质酶的研究将会转化成巨大的经济效益。本研究将采用先进的生化分离技术对黑豆中的一种活性物质-几丁质酶进行提取、纯化及表征,并对其生物活性进行研究。首先将黑豆粉碎后经石油醚脱脂,40%-60%的硫酸铵分级沉淀,然后透析,经DEAE-FF阴离子柱、SephacrylTMS-100HR凝胶柱,SDS-PAGE凝胶电泳检验,得到具有几丁质酶活性的条带,分子量约为20 k D。经电泳纯化的几丁质酶比活力为42U/mg,纯化倍数3.7倍,总回收率35%。进一步将对所得蛋白质进行最适温度、最适p H、作用时间等理化性质表征后,进行生物学活性及抗真菌实验的研究,为黑豆几丁质酶的纯化及应用奠定实验基础。
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