元宝枫叶提取物的新用途.pdf
说明书元宝枫叶提取物的新用途
技术领域
本发明涉及元宝枫叶提取物的一种新用途。
背景技术
元宝枫又名五角枫(Acer Truncatum Bunge)，为槭树科(Aceraceae)槭树属(Acer Linn)的一个落叶乔木。元宝枫树冠荫浓，树姿优美，叶形秀丽，嫩叶红色，入秋后，叶片变色，红绿相映，甚为美观，是营造风景林的主要树种。自90年代以来，元宝枫被开发为集油料、药用、化工、生态、水保、风景观赏等多用途、多效益于一体的经济树种。
元宝枫是高效的经济树种。元宝枫种子颗粒大，种仁含油率达48％，高于油菜籽出油率32％，油橙黄色，其物理、化学性质可与食用植物油媲美。试验证明，在荒坡、荒沟、退耕还林地上发展元宝枫，用良种嫁接苗造林3-5年后，可亩产元宝枫翅果800公斤-1000公斤，榨油150公斤左右，是种植油葵的5.5倍。元宝枫种子除榨油外，种皮中单宁含量高达60％，3年-5年生树，亩产单宁120公斤。元宝枫单宁是优质的鞣料原料。元宝枫叶含7.26％的黄酮，高于银杏叶黄酮含量，叶子中还含有类胡萝卜素、多种维生素等12种与人体健康有关的矿物质元素，可生产系列保健茶和保健品。
发明内容
本发明的目的是提供元宝枫叶提取物的一种新用途。
本发明所提供的元宝枫叶提取物的用途是元宝枫叶提取物在制备抗菌药物中的应用；所述元宝枫叶提取物按照如下方法制备：以元宝枫叶为原料，用丙酮-水或乙醇-水混合溶剂浸取得到的。
其中，所述丙酮-水混合溶剂中丙酮的体积百分数可为50-70％；所述乙醇-水混合溶剂中乙醇的体积百分数可为50-70％；所述混合溶剂与元宝枫干叶的重量份数比可为(8-50)∶1。
其中，所述丙酮-水混合溶剂中丙酮与水的体积份数比具体可为50∶50，或60∶40，或70∶30；乙醇-水混合溶剂中乙醇与水的体积份数比具体可为50∶50，或60∶40，或70∶30。
所述浸取的方法可为在15-30℃下搅拌，或40-100℃下回流；所述在15-30℃下搅拌浸取的时间可为3-24小时；所述40-100℃下回流的时间可为1-6小时。
为了提高所述提取物的纯度，所述浸取后还进行过滤和浓缩；所述浓缩的方法为除去所述过滤得到的滤液中的丙酮或乙醇，然后用乙酸乙酯从水相中萃取，收集乙酸乙酯提取液，再减压蒸发除去所述乙酸乙酯提取液中的乙酸乙酯，得到经浓缩的元宝枫叶提取物浸膏。可将所述浸膏进一步(真空)干燥得到固态的元宝枫叶提取物。
为了进一步提高所述提取物的纯度，在用所述乙酸乙酯进行萃取之前可用石油醚萃取所述水相，除去其中的脂类物质，再收集水相，然后再用乙酸乙酯进行萃取。
所述抗菌药物的活性成分是上述方法得到的元宝枫叶提取物。
需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等，必要时还可以加入香味剂、甜味剂、和着色剂等。
用元宝枫叶提取物制备的抗菌药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
实验证明，用元宝枫叶提取物制备的抗菌药物对细菌(包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌)和真菌具有抑菌作用。
具体实施方式
实施例1、元宝枫叶提取物的制备
将在北京11月份采集的元宝枫叶洗净，在45℃烘干后将其粉碎，用下述方法提取有效物：
用丙酮-水混合溶剂(丙酮的体积百分数为50％)与上述粉碎的元宝枫干叶按重量份数比为20∶1混合，70℃回流3小时，过滤；在同样条件下再回流2小时，过滤，将两次滤液合并。减压蒸发浓缩，除去丙酮，得到含有效物质的水相，用等体积的石油醚分3-4次进行萃取，除去其中的脂类物质，收集水相，再用乙酸乙酯萃取水相，将乙酸乙酯提取液减压蒸发浓缩，除去有机溶剂，得到经浓缩的有效物浸膏，将该浸膏(真空)干燥得到固态的元宝枫叶提取物，将该固态元宝枫叶提取物称为元宝枫叶提取物A。
三次重复实验的元宝枫叶提取物A的提取率(提取率＝元宝枫叶提取物A的质量/干叶的质量)为70±2g/kg干叶。
实施例2、元宝枫叶提取物的制备
将在北京10月份采集的元宝枫叶洗净，在40℃烘干后将其粉碎，用下述方法提取有效物：
用乙醇-水混合溶剂(乙醇的体积百分数为50％)与上述粉碎的元宝枫干叶按重量份数比为35∶1混合，室温25℃下搅拌浸取12小时，过滤，在同样条件下再浸取12小时，过滤，将两次滤液合并，减压蒸发浓缩，除去乙醇，得到含有效物质的水相，对水相中的有效物进一步浓缩，具体方法为：用乙酸乙酯进行萃取，将乙酸乙酯提取液减压蒸发浓缩，除去有机溶剂得到经浓缩的有效物浸膏，将此浸膏进一步(真空)干燥得到固态的元宝枫叶提取物，将该固态元宝枫叶提取物称为元宝枫叶提取物B。
三次重复实验的元宝枫叶提取物B的提取率(提取率＝元宝枫叶提取物B的质量/干叶的质量)为72±2.1g/kg干叶。
实施例3、元宝枫叶提取物的制备
将在北京9月份采集的元宝枫叶洗净，自然晾干或低温烘干(<50℃)后将其粉碎，用下述方法提取有效物：
用丙酮-水混合溶剂(丙酮的体积百分数为70％)与上述粉碎的元宝枫干叶按重量份数比为8∶1混合，40℃回流6小时，过滤；在同样条件下再回流2小时，过滤，将两次滤液合并。减压蒸发浓缩，除去丙酮，得到含有效物质的水相，用等体积的石油醚分3-4次进行萃取，除去其中的脂类物质，收集水相，再用乙酸乙酯萃取水相，将乙酸乙酯提取液减压蒸发浓缩，除去有机溶剂，得到经浓缩的有效物浸膏，将该浸膏(真空)干燥得到固态的元宝枫叶提取物，将该固态元宝枫叶提取物称为元宝枫叶提取物C。
三次重复实验的元宝枫叶提取物C的提取率(提取率＝元宝枫叶提取物C的质量/干叶的质量)为68±1.8g/kg干叶。
实施例4、元宝枫叶提取物的制备
将在北京8月份采集的元宝枫叶洗净，自然晾干后将其粉碎，用下述方法提取有效物：
用乙醇-水混合溶剂(乙醇的体积百分数为70％)与上述粉碎的元宝枫干叶按重量份数比为50∶1混合，100℃回流1小时，过滤；在同样条件下再回流2小时，过滤，将两次滤液合并。减压蒸发浓缩，除去乙醇，得到含有效物质的水相，用等体积的石油醚分3-4次进行萃取，除去其中的脂类物质，收集水相，再用乙酸乙酯萃取水相，将乙酸乙酯提取液减压蒸发浓缩，除去有机溶剂，得到经浓缩的有效物浸膏，将该浸膏(真空)干燥得到固态的元宝枫叶提取物，将该固态元宝枫叶提取物称为元宝枫叶提取物D。
三次重复实验的元宝枫叶提取物D的提取率(提取率＝元宝枫叶提取物D的质量/干叶的质量)为70±2.3g/kg干叶。
实施例5、细菌微量药敏检测试验
(1)配置抑菌药液：分别称取实施例1、2、3和4中的元宝枫叶提取物1mg，用二甲基亚砜10μl溶解后加蒸馏水至1ml(浓度为1mg/ml)。
(2)细菌菌液制备：
菌种：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922、绿脓杆菌ATCC27853、表皮葡萄球菌、溶黄嘌呤厄菌、产碱假单胞菌、粘膜炎布兰汉氏球菌、鲍氏不动杆菌。
将上述菌种分别转种平皿，37℃孵育24小时。用无菌生理盐水制备菌悬液，使用麦氏比浊仪调制菌液为0.5麦氏单位，吸取0.2ml加生理盐水40ml，此时菌液浓度为106CFU/ml。
(3)元宝枫叶提取物对细菌抑菌作用检测：采用倍比稀释法，接种96孔板：
第1-2列孔：每孔100μl MH肉汤+100μl药液→混匀后吸取100μl分别加入到第3-4列中的相应孔；
第3-4列孔：每孔100μl MH肉汤+100μl药液(为第1-2列孔混匀后的药液)→混匀后吸取100μl分别加入到第5-6列中的相应孔；
第5-6列孔：每孔100μl MH肉汤+100μl药液(为第3-4列孔混匀后的药液)→混匀后吸取100μl分别加入到第7-8列中的相应孔；
第7-8列孔：每孔100μl MH肉汤+100μl药液(为第5-6列孔混匀后的药液)→混匀后吸取100μl丢弃。
第1-8列孔对应的第1-8行孔中，每行孔中加入一种细菌菌液100μl(106CFU/ml)。
另做：a.菌液对照孔第9-10列孔：每孔100μl MH肉汤+100μl细菌菌液(106CFU/ml)，其中，第9-10列孔对应的第1-8行孔中，每行孔中加入一种细菌菌液；b.MH肉汤对照孔第11-12列孔：第11-12列孔对应的第1-8行孔中，每孔100μl MH肉汤。
实验设三次重复。将该96孔板放入湿盒37℃孵育，24小时观察。如果有细菌生长，在小孔中呈弥散状混浊，或小孔底部有圆形或网状沉淀，反之为无细菌生长，在无细菌生长的小孔内所含最低药物浓度称为最小抑菌浓度MIC。结果见表1-4。表1-4中的结果为三次实验的平均值。
由表1-4可知，实施例1、2、3和4中的元宝枫叶提取物对细菌均有明显的抑菌作用。
表1 实施例1的元宝枫叶提取物对细菌最小抑菌浓度MIC(mg/ml)
菌 种金黄色 葡萄球 菌 表皮 葡萄 球菌 大肠 杆菌 绿脓 杆菌溶黄 嘌呤 厄菌 产碱假 单胞菌粘膜炎 布兰汗 氏球菌鲍氏 不动 杆菌 MIC0.25 mg/ml0.125 mg/ml 0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.125 mg/ml 0.25 mg/ml
表2 实施例2的元宝枫叶提取物对细菌最小抑菌浓度MIC(mg/ml)
菌 种金黄色 葡萄球 菌 表皮 葡萄 球菌 大肠 杆菌 绿脓 杆菌溶黄 嘌呤 厄菌 产碱假 单胞菌粘膜炎 布兰汗 氏球菌鲍氏 不动 杆菌 MIC0.25 mg/ml0.125 mg/ml 0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.125 mg/ml 0.25 mg/ml
表3 实施例3的元宝枫叶提取物对细菌最小抑菌浓度MIC(mg/ml)
菌 种金黄色 葡萄球 菌 表皮 葡萄 球菌 大肠 杆菌 绿脓 杆菌溶黄 嘌呤 厄菌 产碱假 单胞菌粘膜炎 布兰汗 氏球菌鲍氏 不动 杆菌 MIC0.25 mg/ml0.125 mg/ml 0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.125 mg/ml 0.25 mg/ml
表4 实施例4的元宝枫叶提取物对细菌最小抑菌浓度MIC(mg/ml)
菌 种金黄色 葡萄球 菌 表皮 葡萄 球菌 大肠 杆菌 绿脓 杆菌溶黄 嘌呤 厄菌 产碱假 单胞菌粘膜炎 布兰汗 氏球菌鲍氏 不动 杆菌 MIC0.25 mg/ml0.125 mg/ml 0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.25 mg/ml0.125 mg/ml 0.25 mg/ml
实施例7、真菌微量药敏检测试验
(1)配置抑菌药液：分别称取实施例1、2、3和4中的元宝枫叶提取物2mg，用二甲基亚砜10μl溶解后加蒸馏水至1ml(浓度为2mg/ml)。
(2)真菌菌液制备：
菌种：镰刀菌、克柔念珠菌、青霉菌、交链孢霉菌。
菌种转种PDA平皿，28℃孵育72小时。用无菌盐水冲洗平皿菌落，制备菌悬液，使用麦氏比浊仪调制菌液浊度为0.5麦氏单位，吸取0.2ml菌液用40ml生理盐水稀释，此时菌液浓度为106CFU/ml。
(3)元宝枫叶提取物对真菌抑菌作用检测：采用倍比稀释法，接种96孔板：
第1-2列孔：每孔100μl MH肉汤+100μl药液→混匀后吸取100μl分别加入到第3-4列中的相应孔；
第3-4列孔：每孔100μl MH肉汤+100μl药液(为第1-2列孔混匀后的药液)→混匀后吸取100μl分别加入到第5-6列中的相应孔；
第5-6列孔：每孔100μl MH肉汤+100μl药液(为第3-4列孔混匀后的药液)→混匀后吸取100μl分别加入到第7-8列中的相应孔；
第7-8列孔：每孔100μl MH肉汤+100μl药液(为第5-6列孔混匀后的药液)→混匀后吸取100μl丢弃。
第1-8列孔对应的第1-8行孔中，每两行孔中加入一种真菌菌液100μl(106CFU/ml)。
另做：a.菌液对照孔第9-10列孔：每孔100μl MH肉汤+100μl真菌菌液(106CFU/ml)，其中，第9-10列孔对应的第1-8行孔中，每两行孔中加入一种真菌菌液；b.MH肉汤对照孔第11-12列孔：第11-12列孔对应的第1-8行孔中，每孔100μl MH肉汤。
实验设三次重复。将该96孔板放入湿盒28℃孵育，48小时观察。如果有真菌生长，在小孔中呈弥散状混浊，或小孔底部有圆形或网状沉淀，反之为无真菌生长，在无真菌生长的小孔内所含最低药物浓度称为最小抑菌浓度MIC。结果见表5-8。表5-8中的结果为三次实验的平均值。
由表5-8可知，实施例1、2、3和4中的元宝枫叶提取物对真菌均有明显的抑菌作用。
表5 实施例1的元宝枫叶提取物对真菌最小抑菌浓度MIC(mg/ml)
菌种镰刀菌克柔念珠菌青霉菌交链孢霉菌MIC0.5mg/ml0.5mg/ml1mg/ml0.25mg/ml
表6 实施例2的元宝枫叶提取物对真菌最小抑菌浓度MIC(mg/ml)
菌种镰刀菌克柔念珠菌青霉菌交链孢霉菌MIC0.5mg/ml0.5mg/ml1mg/ml0.25mg/ml
表7 实施例3的元宝枫叶提取物对真菌最小抑菌浓度MIC(mg/ml)
菌种镰刀菌克柔念珠菌青霉菌交链孢霉菌MIC0.5mg/ml0.5mg/ml1mg/ml0.25mg/ml
表8 实施例4的元宝枫叶提取物对真菌最小抑菌浓度MIC(mg/ml)
菌种镰刀菌克柔念珠菌青霉菌交链孢霉菌MIC0.5mg/ml0.5mg/ml1mg/ml0.25mg/ml
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