一种具有抗敏功效的番石榴叶提取物的制备方法与流程
本发明涉及化妆品技术领域，特别是涉及一种具有抗敏功效的番石榴叶提取物的制备方法。
背景技术
番石榴叶为桃金娘科植物番石榴(psidiumguajavalinn.)的干燥叶及带叶嫩茎，在美洲以及亚洲的亚热带地区与热带地区分布广泛，我国的福建、广西、广州等地区有较大的种植面积。番石榴叶中富含的三萜、黄酮、多酚等化学组分具有抗氧化、抗菌等药理作用，在化妆品行业有广泛的应用前景和重要的商业价值。林燕如等采用水提法与醇提法并利用微波前处理对番石榴叶中的黄酮类物质进行提取，提取物中黄酮含量为9.91%。楠极等研究了微波辅助提取法对番石榴叶多酚进行，提取物中多酚含量量为1.41%。谢郁峰等研究了超声提取法对番石榴叶中的总三萜进行提取，提取物中总三萜含量为7.93%。
近年来，生物技术被广泛的应用于天然物质的提取中，如广泛应用于黄酮类化合物的提取实验中的酶解法，可以应用于被细胞壁包围不易提取的原料，原理是充分破坏细胞壁结构，提高所需提取物的浸出率，提取过程一般都采用乙醇为溶剂。但是每种植物的细胞壁各有不同，不同的酶可以酶解的植物细胞壁也各有不同，尤其是酶解效率相差很大。如果能寻找到一种酶解效率高，提取路径环保的番石榴叶提取方法，必将带来较大经济效益。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是，提供一种具有抗敏功效的番石榴叶提取物的制备方法，该制备方法具有提取率高，提取路径环保的优点，该方法制备的番石榴叶提取物具有较好的抗敏功效。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种具有抗敏功效的番石榴叶提取物的制备方法，其特征在于：采用以下步骤：
a、选取新鲜番石榴叶，洗净后置于50℃的真空干燥箱中干燥6~8h，然后进行粉碎，过60~80目筛，得番石榴叶粉；
b、将步骤a所得番石榴叶粉加去离子水制备成质量份数为6~10%的匀浆液，按每克番石榴叶粉添加0.2~1.0g复合酶的比例进行酶解处理，酶解温度为55~70℃，ph值为3.5~6.5，酶解6~8小时，得酶解液；所述复合酶由纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶按照质量比2:1:1配置而成；
c、将步骤b所得酶解液加入萃取釜，设置萃取釜内压力为0.8~1.2mpa，萃取温度为120℃~220℃，萃取时间为30min~60min，萃取剂为纯净水，所述酶解液与萃取剂的质量比为1:1-3，萃取完成得具有抗敏功效的番石榴叶提取物。
现有番石榴叶提取技术，基本上都是采用乙醇为萃取剂，而本发明优选纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶组合成复合酶，先对番石榴叶粉进行酶解，酶解后可以使用纯净水亚临界提取，具有提取效率高、提取路径环保等优点，且本发明制备的番石榴叶提取物具有抗敏功效。
所述番石榴叶均采摘自广西壮族自治区，为桃金娘科植物番石榴psidiumguajaval.的干燥叶。
所述真空干燥箱为dzf-1型立式真空干燥箱，生产商为北京林茂科技公司。
所述纤维素酶和果胶酶均购自北京奥博星生物技术有限公司，酶活力分别为40000u/g和50000u/g。
所述中性蛋白酶酶购自武汉创新化工有限公司，酶活力为30000u/g。
所述亚临界提取设备为cbe-5l亚临界流体提取试验装置，生产商为河南省亚临界生物技术有限公司。
亚临界水(subcriticalwater，sw)，指在一定压力下，温度介于100~374℃之间的凝聚态水，也称之为高温水、超加热水、高压热水或热液态水。亚临界水的物理、化学特性与常温常压下的水有较大差别，随着温度的升高，水的极性、表面张力和黏度都急剧下降，对中极性和非极性化合物的溶解能力会大大增加，其性质更接近于有机溶剂。因此，通过调节亚临界水的温度和压力，使水的极性在较大范围内变化，就可以选择性地提取不同种类的植物有效成分，也可以实现植物有效成分从水溶性成分到脂溶性成分的连续提取，在提取时既可作为溶剂，也可作为催化剂。
本发明采用先酶解植物细胞壁，然后用亚临界水提取番石榴叶中有效成分，所得番石榴叶提取物具有皮肤抗敏功效，同时具有提取效率高，提取路径环保等优点。
本发明实施例1-5所制备番石榴叶提取物的总三萜、总黄酮、总多酚的含量测定。
1、总三萜含量的测定
将本发明所得的番石榴叶提取物以齐墩果酸为对照品，用紫外分光光度计测量提取物中总三萜的含量，检测波长为540±1nm。按齐墩果酸标准曲线回归方程计算提取物中总三萜的含量。番石榴叶提取物中总三萜的紫外吸收图谱见图1。
2、总黄酮含量的测定
用高效液相色谱法（hplc）测定本发明所得的番石榴叶提取物中总黄酮的含量，hplc色谱条件为：色谱柱为inertsilods-sp（250mm×4.6mm，5μm），柱温为室温，检测波长为360nm，流动相a为0.2%的乙酸水溶液，流动相b为甲醇，流速为1.0ml/min，进样量为20μl。番石榴叶提取物的hplc谱图见图2。
3、总多酚含量的测定
采用folin-ciocalteu法测定总多酚的含量。按照没食子酸标准曲线回归方程计算本发明所得的番石榴叶提取物中总多酚的含量。番石榴叶提取物中总多酚的紫外吸收图谱见图3。
经计算分析得番石榴叶提取物中实施例1-5所制备番石榴叶提取物的总三萜、总黄酮、总多酚的含量见表1：
表1番石榴叶提取物中总三萜、总黄酮和总多酚的含量
2、本发明所制备番石榴叶提取物的抗敏功效测定实验
健康昆明种小鼠30只，雌雄各半，体重为18g~22g，试验组、模型对照组及空白对照组每组10只，分组情况如表2所示。用8%的硫化钠酒精溶液给小鼠的背部脱毛（2cm×3cm），将番石榴叶提取物涂布于脱毛区皮肤上，每天1次，连续涂抹7天，模型对照组及空白对照组涂布等量纯净水。末次涂抹50min后于颈背部相同涂抹部位的皮下注射4-氨基吡啶（生理盐水配成0.02%）溶液0.01ml/g，空白对照组则注射生理盐水。记录各组在15min内的舔体次数（以连续舔体至出现短暂停顿，作舔体1次计算）。
表2小鼠分组情况
表3涂抹不同乳液对皮肤瘙痒模型舔体次数的影响
与空白对照组相比，模型对照组的小鼠舔体次数明显增加。实施例3所制备番石榴叶提取物能明显减少因4-氨基吡啶诱导引起的皮肤瘙痒模型的舔体次数，测试数据见表3。从以上的分析可知，本发明所获得的番石榴叶提取物具有很好的抗敏效果。
综上所述，本发明具有提取效率高、提取路径环保无污染，所得番石榴叶提取物具有很好的抗敏效果等优点。
附图说明
图1为番石榴叶提取物中总三萜的紫外吸收图谱；
图2为番石榴叶提取物中总黄酮的hplc谱图；
图3为番石榴叶提取物中总多酚的紫外吸收图谱。
其中图1的纵坐标为波长，横坐标为吸光度；图2的纵坐标为发光强度，横坐标为时间；图3的纵坐标为波长，横坐标为吸光度。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明并不局限于以下实施例。
实施例1：
一种具有抗敏功效的番石榴叶提取物的制备方法，采用以下步骤：
a、选取新鲜番石榴叶，洗净后置于50℃的真空干燥箱中干燥6~8h，然后进行粉碎、过60~80目筛，得番石榴叶粉末；
b、将步骤a所得番石榴叶粉末加去离子水制备成质量份数为6%的匀浆液，按每克番石榴叶粉添加0.2g复合酶，所述复合酶由纤维素酶、果胶酶与中性蛋白酶按照质量比2:1:1组成，所述纤维素酶、果胶酶与中性蛋白酶的质量浓度均为0.2%，酶解温度为55℃，酶解ph值为3.5，酶解8小时后得酶解液；
c、将步骤b所得酶解液采用亚临界提取，提取压力为0.8mpa，提取温度为120℃，提取时间为30min，提取剂为纯净水，所述酶解液与提取剂的质量比为1:1，提取结束后得具有抗敏功效的番石榴叶提取物，所述提取物中总三萜的含量为7.45%，总黄酮的含量为13.6%。总多酚的含量为12.2%。
实施例2：
一种具有抗敏功效的番石榴叶提取物的制备方法，采用以下步骤：
a、选取新鲜番石榴叶，洗净后置于50℃的真空干燥箱中干燥6~8h，然后进行粉碎、过60~80目筛，得番石榴叶粉末；
b、将步骤a所得番石榴叶粉末加去离子水制备成质量份数为7%的匀浆液，按每克番石榴叶粉添加0.4g复合酶，所述复合酶由纤维素酶、果胶酶与中性蛋白酶按照质量比2:1:1组成，所述纤维素酶、果胶酶与中性蛋白酶的质量浓度均为0.2%，酶解温度为60℃，酶解ph值为4.5，酶解8小时后得酶解液；
c、将步骤b所得酶解液采用亚临界提取，提取压力为0.9mpa，提取温度为160℃，提取时间为40min，提取剂为纯净水，所述酶解液与提取剂的质量比为1:2，提取结束后得具有抗敏功效的番石榴叶提取物，所述提取物中总三萜的含量为7.48%，总黄酮的含量为13.8%。总多酚的含量为12.1%。
实施例3：
一种具有抗敏功效的番石榴叶提取物的制备方法，采用以下步骤：
a、选取新鲜番石榴叶，洗净后置于50℃的真空干燥箱中干燥6~8h，然后进行粉碎、过60~80目筛，得番石榴叶粉末；
b、将步骤a所得番石榴叶粉末加去离子水制备成质量份数为8%的匀浆液，按每克番石榴叶粉添加0.6g复合酶，所述复合酶由纤维素酶、果胶酶与中性蛋白酶按照质量比2:1:1组成，所述纤维素酶、果胶酶与中性蛋白酶的质量浓度均为0.2%，酶解温度为65℃，酶解ph值为5.0，酶解8小时后得酶解液；
c、将步骤b所得酶解液采用亚临界提取，提取压力为1mpa，提取温度为180℃，提取时间为50min，提取剂为纯净水，所述酶解液与提取剂的质量比为1:3，提取结束后得具有抗敏功效的番石榴叶提取物，所述提取物中总三萜的含量为7.54%，总黄酮的含量为13.7%。总多酚的含量为12.4%。
实施例4：
一种具有抗敏功效的番石榴叶提取物的制备方法，采用以下步骤：
a、选取新鲜番石榴叶，洗净后置于50℃的真空干燥箱中干燥6~8h，然后进行粉碎、过60~80目筛，得番石榴叶粉末；
b、将步骤a所得番石榴叶粉末加去离子水制备成质量份数为9%的匀浆液，按每克番石榴叶粉添加0.8g复合酶，所述复合酶由纤维素酶、果胶酶与中性蛋白酶按照质量比2:1:1组成，所述纤维素酶、果胶酶与中性蛋白酶的质量浓度均为0.2%，酶解温度为60℃，酶解ph值为5.5，酶解8小时后得酶解液；
c、将步骤b所得酶解液采用亚临界提取，提取压力为1.1mpa，提取温度为200℃，提取时间为60min，提取剂为纯净水，所述酶解液与提取剂的质量比为1:3，提取结束后得具有抗敏功效的番石榴叶提取物，所述提取物中总三萜的含量为7.51%，总黄酮的含量为13.6%。总多酚的含量为12.1%。
实施例5：
一种具有抗敏功效的番石榴叶提取物的制备方法，采用以下步骤：
a、选取新鲜番石榴叶，洗净后置于50℃的真空干燥箱中干燥6~8h，然后进行粉碎、过60~80目筛，得番石榴叶粉末；
b、将步骤a所得番石榴叶粉末加去离子水制备成质量份数为10%的匀浆液，按每克番石榴叶粉添加1.0g复合酶，所述复合酶由纤维素酶、果胶酶与中性蛋白酶按照质量比2:1:1组成，所述纤维素酶、果胶酶与中性蛋白酶的质量浓度均为0.2%，酶解温度为70℃，酶解ph值为6.5，酶解8小时后得酶解液；
c、将步骤b所得酶解液采用亚临界提取，提取压力为0.8~1.2mpa，提取温度为220℃，提取时间为55min，提取剂为纯净水，所述酶解液与提取剂的质量比为1:2，提取结束后得具有抗敏功效的番石榴叶提取物，所述提取物中总三萜的含量为7.51%，总黄酮的含量为13.7%。总多酚的含量为12.3%。
相关知识
【番石榴叶】番石榴叶的功效与作用
【石榴叶】石榴叶的功效与作用及食用方法
番石榴叶的功效与作用禁忌
番石榴叶的营养价值和功效
番石榴叶的功效与作用 详解番石榴叶的4大功效
番石榴叶的作用与功效
番石榴叶提取物抗氧化作用研究
番石榴叶子的功效
番石榴叶泡水喝的功效
番石榴叶泡水喝的功效与作用
网址: 一种具有抗敏功效的番石榴叶提取物的制备方法与流程 https://m.trfsz.com/newsview459632.html
