一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法与流程
本发明涉及植物活性组分提取领域，具体涉及一种利用表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法。
背景技术：
番石榴(psidiumguajava)为桃金娘科番石榴属植物，原产于热带美洲，在我国福建、台湾地区、广东、广西等地均有分布或栽培。现代药理研究表明番石榴叶具有明显的降血糖、抗病毒，抗菌、止泻、抗疟等活性。近年来植物化学研究表明，番石榴叶中可提取的有效部位属于总黄酮类化合物，具有很好的降糖、抗菌、活血化瘀的作用，因而具有很高的开发利用价值。
目前，传统的番石榴叶黄酮提取方法有“水煎煮法”、“乙醇浸渍提取法”、“酶解法”“超临界萃取”等。但是，传统水煎法提取效率较低，而且高温水煮容易导致部分活性物质失活；采用醇提法，黄酮类成分提取率较高，但是乙醇消耗量大，回收率低，因此成本较高，且环境污染严重，产业化生产不可取；酶法提取要求酶具有高度专一性和极高的活性、而且酶法容易受到酶的种类、用量、酶解时间、温度等多种因素的影响，生产环节较难控制；超临界萃取法虽然提取效率较高，但是在生产中存在投资过大，操作繁琐等问题而限制了该方法在生产中的普及应用。因此，开发一种能耗低、时间短、过程清洁、工艺简单又高效，且易于工业化生产的番石榴叶黄酮提取方法显得尤为重要。
微波辅助提取是利用微波的温度效应及电磁场效应来提高植物活性物质的提取率。微波能通过直接作用于物料分子，是整个物料同时被加热，即“体加热”，与普通加热相比，更能达到能量充分利用的效果。微波辅助提取通过偶极离子旋转和离子传导两种方式里外同时加热，使细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的黄酮化合物从细胞中释放出来，被周围的溶剂溶解，因此其热量传递和质量传递方向是一致的，这有助于黄酮类化合物的快速溶出。超声波是一种弹性波，具有一系列的力学、热学、电磁学和化学的超声效应、空化效应、热效应和化学效应等。超声波的空化效应促使溶剂更大程度地渗入细胞中，提高物质的传递速度；而且它的次级效应如机械效应、机械振动、乳化、扩散、击碎和化学效应等可使细胞壁破裂而加速植物中黄酮化合物的扩散和释放。表面活性剂是一类即使在浓度很低时也能显著降低固-液相表(界)面张力的物质。表面活性剂可以通过在表面或界面的吸附作用或在溶液中形成分子聚合体而改变黄酮化合物在水溶液中的溶解性，从而大大提高黄酮的提取效率。如果能够以水代替有机溶剂做溶媒，通过表面利用表面活性剂的增溶、润湿作用，同时结合微波-超声波优点于一体，不仅可以降低企业生产成本，解决了有机溶剂残留问题，同时可以大大提高番石榴叶总黄酮的提取率。
曲芬霞等(曲芬霞，陈存及.闽楠组培快繁技术研究[j].林业实用技术，2010，11：004.)研究了微波法提取竹叶黄酮，探究乙醇浓度、叶片采集时间、料液比和微波提取时间这几个因素对黄酮提取量的影响，得到最佳提取条件为：6月采集叶片、料液比1∶30、60％乙醇浓度、微波提取时间6min。林娜等(林娜，尹礼国，陈云珠.超声波提取硬头黄竹叶黄酮工艺优化[j].安徽农业科学，2011，39(18)：10816-10817.)利用超声波法进行竹叶黄酮的提取竹叶黄酮的最佳提取条件为：乙醇浓度85％，提取温度75℃，提取时间90min，料液比1∶30，该条件下黄酮提取率为1.178％。与传统溶剂提取法相比，超声波提取法与微波提取法虽然能提高黄酮提取率，但提取率的提高并不明显。将超声波与微波提取法联合使用，并利用表面活性剂的吸附作用，能够在不使用有机溶剂的情况下有效提高黄酮提取率。
技术实现要素：
针对以上问题，本发明的提供了一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，旨在简化提取操作，提高提取效率。
为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：
一种从番石榴叶中提取总黄酮的方法，将番石榴叶置于表面活性剂的水溶液中，在微波和超声的辅助下提取，随后经固液分离，即得到所述的包含总黄酮的提取液；
所述的表面活性剂的水溶液中，表面活性剂的质量百分数为1％～3％；
微波的功率为100～150w；超声功率为600～650w。
本发明人通过大量研究发现，采用表面活性剂的水溶液做溶媒，利用表面活性剂的增溶、润湿作用，同时结合微波的热效应和辐射作用以及超声波的空化效应于一体，可以降低企业生产成本，解决了有机溶剂残留问题，同时可以大大缩短番石榴叶总黄酮的提取时间，提高提取效率。本发明方法具有步骤简单、操作方便、成本低廉、提取效率高，且不存在有毒有机溶剂残留的问题，具有很大的发展潜力和应用价值。
本发明采用溶有少量表面活性剂的水溶液作为提取溶剂，利用表面活性剂增溶作用，同时结合微波的电磁效应和超声波的机械作用，有效促进番石榴叶中黄酮化合物的提取效率。
研究表明，不同类别的表面活性剂对萃取效果具有一定影响。
作为优选，所述的表面活性剂为非离子型表面活性剂和阴离子型表面活性剂的混合物。
本发明人研究发现，采用非离子型表面活性剂和阴离子型表面活性剂的复配的表面活性剂方能从番石榴叶中高效提取所述的总黄酮。
所述的非离子型表面活性剂为吐温-40、吐温-80、司班-60、司班-80；
进一步优选，非离子型表面活性剂为吐温-40、吐温-80中的至少一种。
所述的阴离子型表面活性剂为十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠。
进一步优选，所述的阴离子型表面活性剂为十二烷基硫酸钠。十二烷基硫酸钠在水中溶解度随温度升高而增大，在这种特定条件下，十二烷基硫酸钠配合所述的非离子表面活性剂，提取效果更优异。
本发明人发现，合适的阴离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂的质量比对提取效果具有影响，将该范围控制在合适的范围下，可出人意料地提升提取效果。
更进一步优选，所述的表面活性剂为十二烷基硫酸钠和吐温-80的混合物。
作为优选，阴离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂的质量比为1.5～3.5∶1。
进一步优选，阴离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂的质量比为2∶1。
所述的表面活性剂为质量比为2∶1的十二烷基硫酸钠和吐温-80。
作为优选，表面活性剂的水溶液中，表面活性剂的质量百分数为2％～3％，进一步优选为2.5～3％。
作为优选，微波的功率为120～150w。
进一步优选，微波的功率为120w。
作为优选，超声功率为630～650w。
本发明采用所述的表面活性剂以及微波、超声协同，可明显缩短提取时间。作为优选，提取时间为10～20min。
作为优选，番石榴叶预先经干燥、粉碎处理。
作为优选，将番石榴叶干燥至含水量低于或等于2％。
作为优选，采用新鲜番石榴叶在50～70℃，恒温干燥至所述的含水量。
将干燥后的番石榴叶粉碎后过40目筛网，筛下物用作提取原料。
作为优选，所述的番石榴叶与表面活性剂的水溶液的质量比为1∶15～40。
本发明一种优选的提取番石榴叶总黄酮的方法从番石榴叶中提取黄酮的方法，具体包括如下步骤：
步骤(1)番石榴叶的处理
将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
步骤(2)将番石榴叶粉碎物和蒸馏水质量比1∶15～1∶40充分混合后得到料液；
步骤(3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂，混匀后得到混合溶液，所述表面活性剂与水溶液的质量百分比为2％～3％；
步骤(4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为100～150w，超声波功率为600～650w，提取时间为10～20min；
步骤(5)将步骤(4)获得的产物冷却至室温，减压抽滤，所得滤液即为含有番石榴叶黄酮的溶液。
更进一步优选，上述方案中，所述表面活性剂为吐温-40、吐温-80中的至少一种和十二烷基硫酸钠的混合物；其中，吐温-40、吐温-80中的至少一种与十二烷基硫酸钠的质量比为1∶2；所述的表面活性剂进一步优选为十二烷基硫酸钠与吐温-80(且质量比2∶1)。
所述微波功率为120w，超声波功率为630w，提取时间为15min。
本发明研究表明，在所述的表面活性剂以及重量百分比作为溶媒；再配合于所述的功率下的微波和超声的穿透以及空化效果，可协同提升溶媒对提取成分的“增溶”的作用，有助于明显缩短提取时间，提升目的产物的提取率。
本发明的原理是：在所述的提取体系下，使有效成分可以轻易溶出。以溶有合适剂量的表面活性剂的水取代有机溶剂作为提取介质，对有效成分有“增溶”的作用。在所述的协同的微波和超声下，可使极性分子发生共振摩擦从而产生热效应，同时又有穿透性，可以使所述的表面活性剂水溶液和物料内部同时加热，这样不仅利用了热效应，同时由于细胞内部在加热，产生了压力，细胞更容易发生破裂，有效成分可以自由溶出。此外，在所述的协同的微波和超声下，在媒介中引起的“空穴作用”局部产生瞬间的高压来破坏细胞壁和细胞膜结构，从而促进细胞原生质通过细胞壁和细胞膜，溶解于媒介中，使有效成分进一步流出；所以将三者结合同时作用于番石榴叶提取工艺可以大大的提高提取效率，降低成本。
本发明的优点及有益效果：
(1)以溶有少量表面活性剂的蒸馏水溶液作为提取液，取代了传统的有机溶剂。且不属于有毒溶剂，不存在残留的问题。
(2)本发明所采用的表面活性剂十二烷基硫酸钠为阴离子表面活性剂与非阴离子表面活性剂的混合物。阴离子表面活性剂在水中溶解度随温度升高而增大，在这种特定条件下，阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠与非阴离子表面活性剂吐温-80的协同作用能够明显提高黄酮类物质的提取率。
(3)采用本发明所述方法提取番石榴叶总黄酮，提取时间有传统的2h～5h缩短为10～20min，大大缩短了提取时间，大大降低了生产过程中的能耗及成本，提高了提取效率。
(4)采用本发明所述方法提取到的番石榴叶总黄酮，由于避免了长时间的热效应，减少了黄酮发生热分解及被氧化的程度。
(5)本发明所述方法对外部环境无过高要求，同时所需设备简单和操作方法简单，具有潜在的应用前景。
附图说明
图1是不同表面活性剂在同一条件下提取率对比。
具体实施方法
为了更好理解本发明，下面结合实例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实例。
实施例1
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为2∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为2％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为100w，超声波功率为600w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为4.96％。
实施例2
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为2∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为2.5％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为150w，超声波功率为650w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为5.79％
实施例3
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为2∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为3％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为120w，超声波功率为630w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为6.45％。
实施例4
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为3.5∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为3％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为120w，超声波功率为630w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为5.27％。
实施例5
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为1.5∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为3％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为120w，超声波功率为630w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为5.61％。
实施例6
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为3∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为2％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为100w，超声波功率为600w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为5.03％。
实施例7
和实施例3相比，区别仅在于，表面活性剂为十二烷基磺酸钠与吐温-40(质量比2∶1)。结果显示：总黄酮含量为5.03％。
实施例8
和对实施例3相比，区别仅在于，表面活性剂为十二烷基磺酸钠与吐温-80(质量比2∶1)。结果显示：总黄酮含量为5.12％。
实施例9
和对实施例3相比，区别仅在于，表面活性剂为十二烷基磺酸钠与司班-60(质量比2∶1)。结果显示：总黄酮含量为4.43％。
实施例10
和对实施例3相比，区别仅在于，表面活性剂为十二烷基磺酸钠与司班-80(质量比2∶1)。结果显示：总黄酮含量为4.29％。
实施例11
和对实施例3相比，区别仅在于，表面活性剂为十二烷基硫酸钠与吐温-40。结果显示：总黄酮含量为4.65％。
实施例12
和对实施例3相比，区别仅在于，表面活性剂为十二烷基硫酸钠与司班-60。结果显示：总黄酮含量为4.53％。
实施例13
和对实施例3相比，区别仅在于，表面活性剂为十二烷基硫酸钠与司班-80。结果显示：总黄酮含量为4.57％。
实施例14
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基磺酸钠与吐温-80质量比为2∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为1％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为100w，超声波功率为600w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为4.86％。
对比例1
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为2∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为4％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为100w，超声波功率为600w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为3.62％。
对比例2
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为2∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为2％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为50w，超声波功率为500w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为3.53％。
对比例3
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为2∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为2％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为200w，超声波功率为700w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为3.26％。
对比例4
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠，所述表面活性剂占表面活性剂水溶液的质量百分比为2％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为100w，超声波功率为600w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为3.04％。
对比例5
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂吐温-80，所述表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为2％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为100w，超声波功率为600w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为2.63％。
对比例6
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)将步骤(2)的料液进行微波-超声波提取，微波功率为100w，超声波功率为600w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为2.41％。
对比例7
和实施例3相比，区别仅在于，表面活性剂为吐温-40。结果显示：总黄酮含量为2.31％。
对比例8
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为1∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为2％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为100w，超声波功率为600w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为2.84％。
对比例9
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为1∶2，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为2％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为100w，超声波功率为600w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为2.67％。
对比例10
一种表面活性剂协同微波-超声波提取番石榴叶总黄酮的方法，包括以下步骤：1)将新鲜番石榴叶放在电热恒温干燥箱中，温度调节至60℃，恒温干燥，当含水率低于2％时，放入手提式粉碎机中，粉碎6分钟后，过40目筛，得到番石榴叶粉碎物；
2)准确称量将番石榴叶粉碎物5g，和蒸馏水按质量1∶30充分混合后得到料液；
3)向步骤(2)的料液中加入表面活性剂十二烷基硫酸钠与吐温-80质量比为4∶1，混匀后得到混合溶液，所述混合表面活性剂占混合表面活性剂水溶液的质量百分比为2％；
4)将步骤(3)的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为100w，超声波功率为600w，提取时间为15min；
采用nano2-al(no3)3-naoh法测定上述提取得到的番石榴叶总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为2.98％。
上述实施例及对比例仅是为说清楚地说明所做的实例，但本发明的实施方式并不受上述实施例及对比例的限制，其他的任何未违背本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
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