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金花茶鲜叶的毒理学安全性研究.pdf

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2024-12-24 15:53

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中图分类号:R944.4文献标识码:B文章编号:1002 3127(2011)01 0072 03安全性评价金花茶鲜叶的毒理学安全性研究彭亮，赵鹏，李彬，黄超培，姚思宇，覃辉艳(广西自治区疾病预防控制中心，广西南宁530028)关键词:金花茶鲜叶;安全性;小鼠;大鼠作者简介:彭亮，硕士，主管医师，研究方向:保健食品的毒理和功能学研究。金花茶Camellia chrysantha(Hu)Tuyama 属于山茶花科山茶属金花茶组植物，20 世纪 60 年代初在我国广西首次被发现，是世界珍稀的植物资源，仅产于我国广西南部和西南部的亚热带地区，可供园艺观赏、生物研究和保健食用。金花茶叶含有多种微量元素、氨基酸以及黄酮、皂甙、多酚、维生素等，具有抑制肿瘤、抗衰老，增强免疫力，增强心肌收缩力和血管弹性，降血脂及降血压等多种功效 1-3。金花茶叶中很多成分在人体内一定含量范围可以促进健康，但若蓄积量过大，不排除可能会对人体产生慢性危害。本实验对金花茶鲜叶的急性毒性、亚慢性毒性和遗传毒性经行了研究，为其安全性评价提供依据。1材料与方法1.1样品由广西某金花茶产业公司提供的普通种金花茶鲜叶(采摘后 24 h 内)。样品处理依据参考文献 4:称取2 000 g 样品，剪碎后加入 10 倍量的85 热水恒温浸泡 30 min，过滤取滤液，再以同样方法对滤渣浸泡提取 1 次，然后合并 2 次滤液，置85 热水浴中减压浓缩至1 000 mL，即得2 000 mg/mL 浓度的样品提取液(以样品鲜叶计)，测得其比重为 1.1。1.2实验动物及环境清洁级昆明种小鼠，由广西医科大学提供，实验动物合格证号:NO.0001101;SPF 级SD 种大鼠，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物合格证号:NO.0045799。实验动物使用许可证号:SYXK 桂 2007-0003。实验动物室温度:22 25 ，相对湿度:55%70%。1.3菌株鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型 TA97、TA98、TA100 和 TA102 四种菌株，由中国疾病预防控制中心营养与食品安全所提供。1.4实验仪器日立 KY2000 半自动生化仪，西森美康 XT1800i 全自动血球计数仪，西德莱兹 EHF 照相显微镜，香港步琪 R-200 旋转蒸发仪。1.5试验方法 41.5.1急性毒性:采用小鼠急性经口毒性试验，选18 22 g 昆明种小鼠 20 只，雌雄各半，以 0.2 mL/10 g的体积给小鼠灌胃样品提取液 3 次(每次间隔 5 h)，总剂量为66 000 mg/kg(以样品提取液计)，观察记录动物的中毒表现和死亡情况，为期 2 周。1.5.2遗传毒性:采用 Ames 试验、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验进行检测，试验流程依据GB15193-2003 相关章节进行。1.5.3亚慢性毒性:采用大鼠 90 d 喂养试验，选 60 80 g SD 大鼠 80 只，雌雄各半，随机均分为 4 组。根据新资源食品的要求，设20 000、13 333 和6 667 mg/kg(以样品鲜叶计)3 个剂量组和 1 个阴性对照组，以1.0 mL/100 g 的体积给大鼠灌胃相应浓度的样品溶液和蒸馏水，每天 1 次，连续灌胃 90 d。试验期间动物单笼饲养，每天观察动物的活动和生长情况，记录大鼠每周进食量和体重。试验第 45 日对大鼠进行血常规检测，第 91 日上午处死大鼠，取血作血常规和血清生化检测，同时对大鼠进行大体解剖观察，取肝脏、肾脏、脾脏和睾丸等脏器进行称重，计算脏/体比值，并对主要脏器进行病理组织学检查。1.6统计学方法应用 SPSS13.0 统计软件对试验数据进行单因素方差分析和两两比较。2结果2.1急性毒性观察期内各小鼠均未见中毒症状和死亡，观察期结束处死动物，大体解剖观察未见异常，据此判断该样品的小鼠急性经口 LD50 66 000 mg/kg，属无毒级。2.2遗传毒性Ames 试验中四种菌株的回变菌落数均未超过自发回变菌落数的 2 倍，亦无剂量-反应关系;各样品组与阴性组的小鼠骨髓细胞微核率都在0.8 1.2 之间，小鼠精子畸形率都在 1.27%1.33%之间，微核率与精子畸形率的组间比较结果均27毒理学杂志 2011 年 2 月第 25 卷第 1 期J Toxicol February 2011 Vol.25No.1无统计学意义(P 0.05)。表明该样品无遗传毒性。2.3亚慢性毒性2.3.1对大鼠体重、总摄食量和总食物利用率的影响:试验期间各组大鼠生长状况良好，各样品组大鼠每周及总的体重、增重、进食量和食物利用率与对照组比较，差异均无统计学意义(P 0.05)，见表 1，表明该样品对大鼠的体重增长和食物利用率无明显影响。2.3.2对大鼠血象及生化指标的影响:各样品组大鼠在试验中期和末期的各项血常规指标及 9 项血液生化指标均在正常范围，且与对照组值的差异无统计学意义(P 0.05)，见表 2，表明该样品对大鼠的血象及血液生化指标无明显影响。表 1金花茶鲜叶 90 d 喂养试验各组大鼠体重变化及进食情况(珋x s，n=10)性别剂量组(mg/kg)初重(g)终末体重(g)总增重(g)总进食量(g)总利用率(%)雄20 00071.0 2.2541.1 44.8470.1 43.72550 28718.5 1.413 33371.7 2.8546.7 40.7475.0 42.52619 25518.2 1.16 66771.7 3.1523.1 30.6451.4 31.02415 20518.8 1.6对照组71.1 2.8536.6 37.7465.5 38.62622 26717.8 0.9雌20 00068.6 2.9301.3 21.8232.7 21.42017 18211.5 0.713 33368.2 2.1294.5 16.1226.3 16.51886 22012.1 1.06 66769.0 1.8307.0 13.4238.0 13.01900 16812.6 1.0对照组68.4 2.6295.5 20.1227.1 19.81943 17811.7 1.2表 2金花茶鲜叶 90 d 喂养试验各组大鼠血清生化指标检查结果(珋x s，n=10)性别剂量组(mg/kg)谷草转氨酶(u/L)谷丙转氨酶(u/L)尿素氮(mmol/L)肌酐(mol/L)胆固醇(mmol/L)三酰甘油(mmol/L)血糖(mmol/L)总蛋白(g/L)白蛋白(g/L)雄20 000108.8 12.344.1 4.45.94 0.3634.6 3.61.77 0.200.84 0.135.22 0.6082.4 4.539.0 3.713 333115.3 11.547.0 7.16.23 0.5137.1 4.21.83 0.240.91 0.185.41 0.4578.6 5.236.1 4.16 667111.2 16.342.8 4.06.29 0.4437.0 3.31.87 0.280.95 0.125.23 0.4580.0 7.236.5 3.2对照组107.4 10.544.9 5.56.08 0.4436.1 5.01.77 0.230.87 0.125.02 0.3583.5 7.937.8 3.8雌20 000101.4 9.138.6 4.77.07 0.5636.8 5.42.12 0.311.10 0.155.97 0.4386.6 8.138.9 4.113 33396.5 10.041.3 4.66.80 0.4733.3 4.61.98 0.351.05 0.165.66 0.3386.7 5.941.9 3.66 66795.8 10.838.9 5.77.16 0.4836.2 5.62.28 0.381.06 0.145.81 0.4485.9 4.839.9 3.6对照组98.4 7.840.4 7.76.99 0.4437.9 5.52.14 0.380.99 0.125.70 0.4788.1 9.841.1 4.62.3.3对脏器的影响及病理组织学观察结果:各样品组大鼠脏器重和脏体比与对照组比较，差异均无统计学意义(P 0.05)。对肝脏、肾脏、脾脏、胃、十二指肠、睾丸和卵巢等脏器的组织病理切片检查结果显示，各组均有 1 2 只大鼠的肝脏汇管区和肾间质部有轻度的炎症细胞浸润，以上组织病变属动物的自发病变，且各组动物的病变程度相似，故可以排除是样品所致。表明该样品对大鼠的上述脏器组织无损害作用。3讨论金花茶是广西特有的世界稀有茶种，其茶叶不但色味俱佳，还能祛病驻颜，被喻为“茶族皇后”。近年来随着工人繁育金花茶的成功，金花茶茶叶也开始步入人们的生活。一般传统认为，饮茶是安全的，但是近年来，由于工业污染以及茶属植物对氟、铝元素的富集属性，已证实长期饮茶有可能会引起慢性中毒，所以对新茶种的安全性研究显得愈发重要。本研究从毒理学角度出发，以金花茶的鲜叶为研究对象，对其急性毒性、遗传毒性和亚慢性毒性(大鼠 90 d 喂养试验)进行了研究，各项研究结果均未提示样品有毒作用，最大未观察到有害作用剂量(NOAEL)大于20 000 mg/kg，以人体敏感性为实验动物的 100 倍计，成人每日饮用1 200 mL 浓度为 1%的金花茶，是相对安全的，而李奕和曹进 5的研究结果表明，每日摄入 700 mL 的 1%的37毒理学杂志 2011 年 2 月第 25 卷第 1 期J Toxicol February 2011 Vol.25No.1市售普通红茶、绿茶或茶砖都有可能导致慢性铝中毒。金花茶的安全性较高可能跟其生长于原生环境或植物自身属性有关。上述研究结果，可为金花茶叶的安全性评价提供一定依据，但由于金花茶叶的成分复杂，饮用史尚短，长期饮用是否会对人体产生慢性或者蓄积性危害，目前还缺乏资料。要系统完整的评价其安全性，还需要进行亚慢性毒性中的生殖毒性试验和代谢试验，并对其慢性(致癌)毒性进行深入的研究。参考文献1 秦小明，宁恩创，李建强.金花茶食品新资源的开发利用 J.广西热带农业，2005，97(2):20-22.2 陈全斌，湛志华，张巧云，等.金花茶叶中黄酮甙元的分离提纯及其表征J.广西热带农业，2005，101(6):10.3 梁机，杨振德.从茶多酚及氨基酸含量比较 8 种金花茶制茶适宜性J.广西科学，1999，6(1):72.4 中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会.食品安全性毒理学评价程序和方法(GB15193.1-15193.21)S.北京:中国标准出版社，2003:17-58，86-88.5 李奕，曹进.茶中铝元素的安全性评估J.国外医学医学地理分册，2005，26(1):26-28.(收稿日期:2010 03 11)中图分类号:TQ658.3文献标识码:B文章编号:1002 3127(2011)01 0074 03安全性评价12 种染发剂对中国仓鼠卵巢细胞的染色体畸变试验王翀，张宏伟，李立，魏岚(中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所，北京 100021)关键词:特殊用途化妆品;染发剂;染色体畸变试验作者简介:王翀，助理研究员，研究方向:环境毒理学。化妆品是指以涂擦、喷洒或者其他类似的方法，散布于人体表面的任何部位，如皮肤、毛发、指甲、口唇等，以达到清除不良气味、护肤、美容和修筋目的的日用化学品 1。随着生活水平的提高及审美观念的不断变化，人们对外表的追求也日新月异。而特殊用途化妆品是指用于育发、染发、烫发、脱毛、美乳、健美、除臭、祛斑和防晒的化妆品 1。近来的监测发现化妆品皮肤病逐年增多，尤其是特殊用途的化妆品。因此特殊用途化妆品的安全性已经引起了广泛的关注。特殊化妆品的申报需经过检验、整理申报材料、申请初审、初审、申请终审、终审等程序。本研究按照化妆品卫生规范(2007)规定从毒理学方面为评审提供可靠依据。1材料与方法1.1材料1.1.1受试物:所有特殊用途化妆品均为送检产品，包括染发剂及焗染膏共计 13 件。均由两剂组成，按照一定比例混匀，现用现配。用不含血清的 DMEM 培养液稀释后用于试验。1.1.2细胞:中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株。1.1.3主要仪器:DKB-600B 型电热恒温水箱(上海一恒科技有限公司)，LD4-8 型低速离心机(北京医用离心机厂)，NAPCO-5410 型二氧化碳孵箱(美国Precision Scientific 公司)，SCI-BRIDGE 无菌超净工作台(北京赛伯乐实验仪器有限公司)，日本 OLYMPUSIX70-S8F 型倒置显微镜，日本 SANYO 全自动高压灭菌锅。1.1.4主要试剂:胎牛血清(Hyclone 公司)，丝裂霉素(Kyowa Hakko Kogyo，日本)，环磷酰胺(上海华联制药有限公司)，DMEM 培养基(Hyclone 公司)，6-磷酸葡萄糖(G-6-P)、辅酶 NADP 均由美国 Sigma 公司提供。1.1.5所用溶液及配制 S9混合物:S94 ml，0.02 ml6-磷酸葡萄糖(G-6-P)，1.791 mg 的 NADP(氧化型辅酶)和 1.65 mol/l 的 KCl 各 0.02 ml 组成及 0.4mol/L 的 MgCl20.02 ml。S9终浓度为 2%。丝裂霉素:终浓度为 0.8 g/ml。环磷酰胺:终浓度为10 g/ml。1.1.6代谢活化系统:使用经苯巴比妥钠和-萘黄酮联合诱导的大鼠肝匀浆并加相应的辅助因子配制成47毒理学杂志 2011 年 2 月第 25 卷第 1 期J Toxicol February 2011 Vol.25No.1

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