利用Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量 检测氨基酸饮料的氨基酸
利用Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量
检测氨基酸饮料的氨基酸
和光纯药工业株式会社 试剂化学实验室 須藤 勇紀
◆前言
自从天冬酰胺在1806年从芦笋汁中分离成功以来，人们开始发现氨基酸，并将其大致分为四类，即作为营养物质的利用，作为味道成分的利用，生理作用的利用，反应性的利用，这些功能在我们生活中是不可缺少的 1）。另外，在动物体内无法合成的氨基酸既是动物的必需氨基酸，也是很重要的食物营养素。
在日本实施的1991年特定保健食品体系、2002年保健功能食品体系、2015年功能性食品体系过程中，也是期待着将氨基酸作为保健品用于国民自我治疗药物的实践中 2,3）。功能性标示食品制度因其呈报制度更便于新企业参与。2017年3月特定保健用食品的数量为1,127件，功能性标示食品从以往的815件正在急剧增加中。从而可预计保健食品市场将迅速扩大。氨基酸作为营养素的功能已被广泛认可，以饮料，健康饮料，果冻等多种形态的氨基酸的食品流通于市场中 1），未来也将继续推出更多含有氨基酸的新型食品。
◆3-氨基吡啶-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯（APDS）衍生化
高效液相色谱法（HPLC）中的氨基酸分析衍生化技术是很久以前便存在的，因此市面上也存在许多种类的衍生剂，其中包括茚三酮和邻苯二甲醛。本次介绍的APDS氨基酸衍生化技术是一种具有高疏水性，且因其高电离效率更有利于反相LC/MS（/MS）的方法。
该方法不仅用于味之素株式会社的“Amino index® 癌症风险筛选”（AICS）7）。在食品分析中也用于氨基酸分析专用装备（UF-Amino Station）的分析案例 8）。
Wakopak® Ultra APDSTAG® 是一种专用分析柱，可利用LC / MS / MS仪器对APDS-氨基酸衍生物进行分离分析。本次我们介绍的是使用该柱分析市售氨基酸饮料中的氨基酸种类。
◆实验方法和结果分析
样品前处理和衍生化的流程如图1所示，LC / MS / MS条件如表1所示。 定量采用内标法进行。在这次实验的饮料中，据材料记载氨基酸种类含有甘氨酸（Gly），丙氨酸（Ala），缬氨酸（Val），亮氨酸（Leu），异亮氨酸（Ile）和精氨酸（Arg）这六种种类，但市售饮料中都不含表1的No.13〜20的氨基酸类。图2显示的是市售饮料中的6种氨基酸的MRM色谱分析图。接下来，将氨基酸标准品加入到获得该色谱的样品中，并进行回收实验。图3显示的是添加标准品后饮料的MRM色谱图，而图4则是加标回收实验的结果显示图。回收率高达99-103％。
根据这次研究的结果显示，使用Wakopak® Ultra APDS TAG® 进行APDS衍生化的氨基酸定量检测是有效的。虽然这次推出的结果仅限于饮料，但对于分析其他食品和培养液等样品也是有用的，欢迎采购此产品用于定量分析氨基酸。
表１．LC/MS/MS条件
设备
Prominence LC-20A XR（岛津公司）
柱
Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1×100 mm（W）
防护过滤器
SunShell RP防护过滤器（Cromanic Technologies）
流动相A
APDS TAG® 洗脱液
流动相B
60％乙腈
梯度条件
0min（. A：B=94：6）→0.05min.（. 92：8）→1.70min.（92：8） →1.71min.（88：12）→4.95min.（70：30）→5.95min.（40：60）→5.96min.（5：95）→6.70min.（5：95）→6.71min.（94：6）→12min.（94：6）
流量
0.3 mL/min.
柱温
40 ℃
注射量
1μL
设备
LCMS-8030 Plus（岛津公司）
电离
ESI positive
测量模式
MRM
DL温度
250 ℃
雾化器气体流量
1.5 L/min.
加热块温度
250 ℃
干燥气体流量
10 L/min.
No.
组件名称（简称）
分子量
监测因子（m / z）
前体
制品
1
甘氨酸（Gly）
75.1
196.1
121.0
2
甘氨酸-13C2，15N（Gly-IS）
78.1
199.1
121.1
3
丙氨酸（Ala）
89.1
210.1
121.0
4
丙氨酸-13C3（Ala-IS）
92.1
213.1
121.1
5
缬氨酸（Val）
117.2
238.1
121.0
6
缬氨酸-13C5, 15N（Val-IS）
123.1
244.1
121.1
7
亮氨酸（Leu）
131.2
252.1
121.0
8
异亮氨酸（Ile）
131.2
252.1
121.0
9
亮氨酸-5,5,5-d3（Leu-IS）
134.2
255.1
121.1
10
异亮氨酸-13C6,15N（Ile-IS）
138.1
259.1
121.1
11
精氨酸（精氨酸）
174.2
295.1
175.1
12
精氨酸-15N4（Arg-IS）
178.2
299.1
179.1
13
肌氨酸（Sar）
89.1
210.0
121.0
14
羟脯氨酸（Hypro）
131.1
252.1
121.0
15
天冬酰胺（Asn）
132.1
253.1
121.0
16
天冬氨酸（Asp）
133.1
254.1
121.0
17
谷氨酰胺（Gln）
146.1
267.1
121.0
18
谷氨酸（Glu）
147.1
268.1
121.0
19
α-氨基己二酸（α-AAA）
161.2
282.1
121.0
20
瓜氨酸（Cit）
175.2
296.3
121.0
图2.市售饮料中6种氨基酸成分的MRM色谱图
图3.添加标准品后饮料的MRM色谱图
图4.加标回收实验的结果显示图
<致谢>感谢味之素股份有限公司的每一位同仁对本产品的合作。
Wako Pack® Ultra APDS Tag®通用LC / MS可以实现高灵敏度和高速氨基酸分析。
◆产品列表
产品编号
产品名称
包装
235-63973
Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1mm × 100mm（ W）
1支
◆相关产品
产品编号
产品名称
标准/制造商
规格
014-23841
Amino Acid Analysis Reagent (for LC/MS) (AminoTag(R))
氨基酸分析试剂
（用于LC/MS）
用于氨基酸自动分析
100mg
011-14463
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2
氨基酸混合标准溶液, AN-2型
用于氨基酸自动分析
1mL×5A 5mL
015-14461
012-08643
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B
氨基酸混合标准溶液, B型
用于氨基酸自动分析
1mL×5A 5mL
016-08641
019-08393
Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H
氨基酸混合标准溶液, H型
用于氨基酸自动分析
1mL×5A 5mL
013-08391
293-73701
APDS TAG® Wako Amino Acids Internal Standard Mixture Solution
用于氨基酸自动分析
1套
010-23061
APDS Tag Wako Eluent
APDS标签洗提液
用于氨基酸自动分析
1L
019-23151
APDS Tag Wako Borate Buffer
APDS标签硼酸盐缓冲液
用于氨基酸自动分析
1L
380-04131
SunShell RP Guard Filter Starter kit
（a holder, a cartridge, a tubing）
Cromic技术
1套
[参考文献]
[1] 味の素株式会社 編：「アミノ酸ハンドブック」 （工業調査会）（2003）.
[2] 大澤 俊彦：化学と生物，44 （6），406 （2006）.
[3] 和田 他：分析化学，65 （6），301 （2016）.
[4] 湯田 直樹：健康・栄養食品研究，16 （1），1 （2017）.
[5] 特許第 4453363 号．
[6] 宮野 博：和光純薬時報，79 （1），2 （2011）.
[7] 今泉 明：化学と生物，53 （3），192 （2015）.
[8] 渡邊 他：島津評論，69 （1・2），47 （2012）.
相关知识
NOW美国诺奥 左旋肉碱氨基酸胶囊 500mgX60粒
氨基酸与维生素联合检测
氨基酸肥
喝氨基酸饮料能减肥吗？
氨基酸饮料喝了会皮肤过敏
服用氨基酸能减肥吗
氨基酸的副作用有哪些氨基酸的副作用
琼浆氨基酸的副作用 琼浆氨基酸吃多久见效
谷比利氨糖软骨素透明质酸片，养护关节的好帮手！
琼浆氨基酸的作用 琼浆氨基酸的三大功效
网址: 利用Wakopak® Ultra APDSTAG® 定量 检测氨基酸饮料的氨基酸 https://m.trfsz.com/newsview864579.html
