磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）羧化酶活性的测定是了解该酶功能的重要手段，其基本原理主要基于酶在特定条件下的催化反应。PEP羧化酶在C4植物和CAM植物中扮演着固定CO2的关键角色。
催化反应过程
在Mg2+的存在下，PEP羧化酶能够催化PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）与HCO3-（碳酸氢根离子）发生反应，生成草酰乙酸（OAA）。这一反应是植物固定CO2的关键步骤之一。
随后，生成的草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH）的催化下，进一步被NADH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的还原态）还原为苹果酸（Mal）。这一连串的反应不仅体现了PEP羧化酶在碳固定过程中的核心作用，还展示了酶偶联法在测定酶活性中的应用。
为了定量测定PEPC的活性，通常采用酶偶联法，并借助紫外分光光度计在340nm处测定反应体系的吸光度变化。这是因为NADH在340nm处具有特征吸收峰，其消耗速率与PEP羧化酶的活性密切相关。
在实验过程中，通过监测NADH的吸光度变化（即ΔA=A0-A1，其中A0为反应前的吸光度，A1为反应后的吸光度），可以计算出NADH的消耗速率。进一步地，根据NADH的消耗速率和反应体系中的酶浓度等参数，可以推算出PEPC的活性。返回搜狐，查看更多
