氯霉素溶液（34mg/ml)试剂
特别提示：包括氯霉素溶液（34mg/ml)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：氯霉素溶液（34mg/ml)
英文名称：Chloramphenicol Solution
产品货号：WH0226
产品规格：5ml
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CAS：51-48-9
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分子量：776.87
别名：2-甲状腺素;左旋甲状腺素;左甲状腺素;甲狀腺素
储存条件：2～8℃
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货号：QN0021
规格：10mg
CAS：143664-11-3
分子式：C34H33N3O5
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储存条件：-20℃
名称：博莱霉素
货号：QN0065
规格：1.25ml|8×1.25ml
本品Zeocin是一种属于争光霉素家族的糖蛋白抗生素， 在体内能作用于大多数细菌(包括E. coli)、真菌(如：酵母菌)、植物细、动物细胞。
CAS：9041-93-4
分子式：C55H83N19O21S2Cu
分子量：1137.41
储存条件：-20℃避光
纯度：100 mg/mL
性状：淡绿色液体
浓度：100 mg/mL
Zeocin试剂是博来霉素抗生素家族的一个成员。 其抗性由编码一种 13,665 道尔顿蛋白质的 Sh ble 基因赋予。 在表达这种蛋白质的细胞中，Zeocin无法结合和切割细胞 DNA。 Zeocin对大多数好氧细胞有效，可用于选择哺乳动物和昆虫细胞系、酵母以及细菌。 选择细胞时，Zeocin的用量为 50-2000 ug/ml(通常 300 ug/ml)，具体取决于细胞类型。
名称：嘌呤霉素
货号：QN0078
规格：25mg|100mg
本品是蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。
CAS：58-58-2
分子式：C22H29N7O5·2HCl
分子量：544.43
储存条件：-20℃
纯度：≥98%(TLC)
性状：白色或白中带有黄色的粉末
别名：二盐酸嘌呤霉素;嘌呤霉素盐酸盐
溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml。
嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)，赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
使用方法：
1.建议使用浓度
哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定;
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
2.溶解方法
用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存;也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的储存液。
3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定(以shRNA转染或者慢病毒转导为例)
嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线(kill curve)。
1)Day 1：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜;
2)Day 2：
a)准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15μg/mL，至少5个梯度);
b)往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基;之后37℃孵育细胞;
3)Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。
4)根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基;
5)每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物最低浓度。
4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选
等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。
1)细胞转染48h后，将细胞(原样或稀释)置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。
注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。
2)每隔2-3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。
3)筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。注意：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。
4)转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。
注意事项：
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。
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