番石榴叶及其提取物的新用途的制作方法
专利名称：番石榴叶及其提取物的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种番石榴叶及其提取物在制备用于预防或治疗对虾白斑综合症病 毒WSSV药物中的应用，属于水产养殖技术领域。
背景技术：
经过近三十年的快速发展，对虾养殖业已成为我国农村经济的重要组成部分，在 提高沿海地区农渔民就业和经济收入中发挥了重要的作用。但是，随着规模的不断扩大和 环境的恶化，对虾病害问题也日趋严重，给对虾养殖业者带来巨大的经济损失自从1974年 Couch报道首例对虾杆状病毒(BP)以来，已发现的对虾疾病病原包括病毒、细菌、真菌、立 克次氏体和寄生虫等达40多种，众多疾病当中危害较大的是病毒病和细菌病，而其中危害 最严重的是对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus，WSSV)，每年给对虾养殖业 造成巨大经济损失，至今仍未得到完全控制，成为目前对虾养殖业可持续发展的主要障碍 之一。1995年被国际兽疫局、联合国粮农组织以及亚太地区水产养殖发展网络中心将其列 为需要报告的水生动物病毒性疫病之一。在传统的防治方法中，主要是利用化学消毒剂对水体进行消毒，以阻断其在水中 的传播，但是化学消毒剂在杀灭病毒的同时，对细菌、藻类以及其他生物可能也有杀灭做 用，破坏了虾池生态平衡，不利于对虾生存环境的稳定。
发明内容
本发明的目的在于提供番石榴叶或其提取物在制备用于预防或治疗对虾白斑综 合症病毒药物中的应用。番石榴叶提取物资源丰富、成本低、加工方便、较少抗药性和药 物残留、毒副作用小，且可有效杀灭水体中的对虾白斑综合症病毒，降低该病毒在水中的传播。实际上，本发明番石榴叶及其提取物在制备预防或治疗对虾白斑综合症病毒药物 中的应用。本发明所述的番石榴叶提取物可以是番石榴叶水提取物，先将番石榴叶粉碎，然 后加水提取后，高压灭菌、离心除渣，得番石榴叶水提取物的原液，实际使用时调整养殖水 体中番石榴叶提取物的质量浓度范围是I-IOOg/吨水。本发明所述的番石榴叶还可以是番石榴叶原材料，使用时将其粉碎后直接抛洒于 养殖水体或者与饲料混合投喂对虾，并调整养殖水体中番石榴叶粉末的质量浓度范围是 I-IOOg/ 吨水。本发明的优点是本发明采用的番石榴叶资源丰富、成本低、加工方便、较少抗药 性和药物残留、毒副作用小等特点，本发明制备的番石榴叶或番石榴叶提取物可以有效的 杀灭水中的对虾白斑综合症病毒，以降低该病毒在水中的传播的可能性，达到预防该病毒 传播的目的。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，以下试剂如无特殊说明均为市售 或采用常规手段制备获得。实施例1番石榴叶粉末的制备取番石榴叶10g，按常规方法粉碎、过筛后制得番石榴叶粉末，灭菌后分装即可，使 用时直接抛洒入海水养殖水体中并使养殖水体中番石榴叶粉末的浓度为I-IOOg/吨水即可。实施例2番石榴叶水提取物的制备取番石榴叶药材lg，经粉碎过筛后，加入99mL水浸泡，室温浸泡24小时，然后， 121°C高压灭菌20min，5000g离心15min除掉药渣，作为储备液密封4°C保存备用，药物的浓 度相当于10mg/mL，使用时直接抛洒入海水养殖水体中并使养殖水体中番石榴叶提取物的 浓度为I-IOOg/吨水即可。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。以下通过试验来验证番石榴叶及其提取物作为抗对虾白斑综合症WSSV的新用 途。一、番石榴叶提取物与其它原料对对虾白斑综合症病毒的影响对比1.1试验原料的制备称取番石榴叶Ig加入99ml蒸馏水，室温浸泡24h，然后，121°C高压灭菌20min， 5000g离心15min除掉药渣，作为储备液密封4°C保存备用，药物的浓度相当于10mg/mL。同时采用以下单味原料作为对比，称取丁香、板蓝根、辣蓼、百部、金银花、苍术、黄 岑、苦辣皮、白芪、穿心莲等10种超微粉碎的原料各1克，分别加入99ml蒸馏水，室温浸泡 24h，然后，121°C高压灭菌20min，5000g离心15min除掉药渣，作为储备液密封4°C保存备 用，药物的浓度相当于10mg/mL。1.2实验对虾的养殖实验用虾为凡纳宾对虾Litopenaeus Varmamei，购自海南省陵水黎族自治县某 虾场，体重约8克，在海南陵水热带水产研究中心陵水新村试验场内暂养一周，实验前将 0. 5m3的玻璃缸清洗干净，用0. 5%的高锰酸碱溶液浸泡Ih消毒，然后冲洗干净。放虾前一 天注入海水并连续充气。养殖海水经自然经沉淀后沙滤，保持连续充气，每天上午虹吸粪 便，隔天换水，换水量约为1/3-1/2，温度28-320C，盐度32-33，溶解氧6. 6-7. Omg/L,氨氮 0.3-0.5mg/L。完全适应后挑选体色健康、大小均勻的凡纳滨对虾进行实验。实验用虾每天 分三次投料，08 00，17 00和22 00，投料量为虾重的5 %-8 %，并根据摄食情况适当调节投 喂量。1. 3 WSSV感染病毒液的制备选取具典型WSSV病症，并经PCR检验为WSSV阳性的凡纳滨对虾，取肌肉组织 0. lg，加入Iml沙滤海水，冰浴勻浆，然后，再用海水稀释到1000倍，作为病毒粗提液。1. 4注射液的制备12种原料储备液各取lml，分别加入9ml的病毒粗提液，混勻，0.22 μ m硝酸纤维素滤膜过滤除菌，室温放置24h，作为病毒注射液，药物的浓度相当于lmg/mL ；另外，取各种原 料储备液加入9倍体积的海水，过滤除菌后作为阴性对照注射液；最后，分别把海水、Iml海 水加9ml病毒粗提液过滤除菌后作为空白对照和阳性对照注射液。1. 5人工感染实验把注射液分别注射对虾，每尾对虾注射50μ L，分别养在玻璃钢桶中，每天观察死 亡情况。1. 6 WSSV 的检测取0. Ig 对虾肌肉组织，加入 PBS 缓冲液(8gNaCl，0. 2gKCl，1. 44gNa2HP04 和 0. 24g KH2PO4,加水定容至1L，用HCl调节溶液PH值至7. 4，高温高压灭菌20min备用)lmL，冰浴勻 浆，6000rpm离心5min。取上清液50 μ L加入1 μ L蛋白酶K(10mg/ml)，煮沸15min，立即放 于冰上5min后，8000rpm离心IOmin。上清液用作PCR检测模板，利用中山大学提供的WSSV 检测试剂盒进行检测。表1抗对虾白斑综合症病毒原料筛选结果
权利要求
番石榴叶及其提取物在制备用于预防或治疗对虾白斑综合症病毒药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的番石榴叶提取物为其水提取物。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于使用时调整养殖水体中番石榴叶或其 提取物的质量浓度范围是I-IOOg/吨水。
全文摘要
本发明公开了番石榴叶及其提取物在制备预防或治疗对虾白斑综合症病毒药物中的应用，本发明采用的番石榴叶资源丰富、成本低、加工方便、较少抗药性和药物残留、毒副作用小，本发明所述的番石榴叶或番石榴叶提取物可以有效的杀灭水中的对虾白斑综合症病毒，以降低该病毒在水中的传播的可能性，达到预防该病毒传播的目的。
文档编号A61K127/00GK101946812SQ20101026834
公开日2011年1月19日 申请日期2010年8月30日 优先权日2010年8月30日
发明者冯娟, 李卓佳, 王瑞旋, 郭志勋 申请人:中国水产科学研究院南海水产研究所
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