木瓜蛋白酶实验指导
木瓜蛋白酶的提取纯化实验报告
木瓜蛋白酶的分离纯化一、目的（1）它是利用未成熟的番木瓜（Carica papaya）果实中的乳汁中提取粗酶液，并进一步纯化，获得高纯度的木瓜蛋白酶。
（2）通过此次试验，熟悉掌握木瓜蛋口酶分离纯化的基本步骤和原理，了解离心分离，萃取等实验技术。
二、原理木瓜蛋口酶（Papain ）是一种毓基蛋白酶，它分解比胰脏蛋口水解酶更多、更广泛的蛋白底物。
它也具有脂酶活力。
其分子量约为23000 左右。
在25 °C , pH6. 2时，1分钟生成lumol酪氨酸的酶量为1 单位。
木瓜蛋白酶是单条肽链，有211氨基酸残基折叠成两部分形成裂缝，酶分子只有1个疏基，对酶活力是必需的，激活剂有半胱氨酸，硫化物，亚硫酸盐和EDTA ；抑制剂有铳基试剂，包括重金属和竣基试剂和过氧化氢。
酪蛋口是一种蛋口质，它被木瓜蛋口酶降解生成的酪氨酸在紫外光区275nm处有吸收峰，根据测定275nm处的吸收值，可以判定木瓜蛋口酶的酶活力。
吸收值的大小与酪氨酸含量的多少有关，吸收值大说明酪氨酸含量高，也就是说木瓜蛋口酶分解的酪蛋口多，酶活力高。
三、实验材料番木瓜汁；PEG （聚乙二醇，分子量为6000）；（NH5）2SO1；三氯乙酸（TCA）；酪氨酸；考马斯亮蓝四、仪器设备（1 ）离心机4000-lOOOrpm （冷冻式或非冷冻式）（2 ）752紫外分光光度计（3 ）水浴箱（4 ）冰箱（5 ）榨汁机五、玻璃器皿（以组为单位）试管（6 ） , 100 mL烧杯（2 ）,吸管（1 ）、玻棒（1 ）,试剂瓶（1000 mL、500 mL、250 mL等），移液管或移液器5mL （l）、lmL（2）、0. 5mL （ 1 ）,漏斗（3 ）,滤纸（3-6 ）等六、实验试剂配制及实验步骤氨酸的标准曲线试管编号01234一标准酪氨酸溶液（ml ）00.20.40.60.8 1.0蒸馅水（ml ）2 1.8 1.6 1.4 1.21紫外吸光度A275nm00. 0660. 1750. 3000.4300. 550将上述各管混匀，静置2min,测定各管的A275nm,做标准曲线,曲线如下：酪氨酸曲线（二）粗酶活测定1试剂（1）3mg/ml木瓜蛋白酶液（用0. lmol/L的磷酸缓冲液，pH 7. 2 配制）（2 ） 0. lmol/L的磷酸缓冲液，pH 7.2（3 ）用0. lmol/L磷酸缓冲液（pH 7. 2 ）配制含80mmol/L半胱氨酸（4）1%酪蛋白溶液：用0. lmol/L磷酸缓冲液（pH7.2 ）配制（5 ）15%三氯乙酸（TCA ）溶液2方法量取酶液0.2 mL,加入激活剂0.25 mL于带塞试管中，在37°C水浴中保温8 min,吸取预热37°C酪蛋白液（质量分数为1%） 1 mL加入此管，在37°C水浴中反应10 min,加入三氯乙酸（TCA） 2 mL摇匀, 静置5 min；另取样液（己激活）0.3 mL置另一带塞试管中，加入TCA 2 mL, 37°C保温10 min后，加入预热至37°C的酪蛋白液1 mL, 静置5 min,测2个管的A275 nm值，同时做2个平行试验。
木瓜蛋白酶检验方法
木瓜蛋白酶检验方法嘿，咱今儿就来聊聊木瓜蛋白酶的检验方法。
这木瓜蛋白酶啊，就像是个隐藏在各种物质里的小精灵，得想办法把它给找出来呢！先来说说最常见的一种方法，就好比是在一群小朋友里找出那个最调皮的。
通过特定的化学反应，让木瓜蛋白酶现形。
就像警察抓小偷，一旦对上号了，它就跑不掉啦！这种方法简单直接，能快速给它个“下马威”。
还有啊，有一种方法像是拿着放大镜在仔细观察。
利用一些专门的试剂，跟木瓜蛋白酶产生独特的反应，然后我们就能从这些反应中发现它的踪迹啦。
这就好像是在玩捉迷藏，我们根据线索一点点去找到它的藏身之处。
另外呢，也可以用一些仪器设备来帮忙哦。
这些仪器就像是超级侦探的秘密武器，能够精准地检测到木瓜蛋白酶的存在。
它们能把那些细微的变化都给捕捉到，可厉害啦！想象一下，如果我们要检验一批食品中有没有木瓜蛋白酶，那可不能马虎呀！得用各种方法去试，确保不放过任何一个“小调皮”。
这就跟我们找东西一样，得从各个角度去看，去尝试。
那怎么知道这些方法有没有用对呢？这就得考验我们的细心和经验啦！就像老猎手能分辨出猎物的踪迹，我们也要能准确判断出检验结果的真假。
要是不小心弄错了，那可就麻烦咯！你说这木瓜蛋白酶检验重要不？那当然重要啦！它要是在不该出现的地方出现了，或者该出现的地方没出现，都会带来不小的影响呢！所以我们得好好掌握这些检验方法，就像战士握紧手中的武器一样。
总之呢，木瓜蛋白酶的检验方法有很多，我们得根据具体情况选择合适的。
而且要不断学习和探索新的方法，这样才能更好地应对各种情况呀！大家可别小瞧了这小小的木瓜蛋白酶，检验它可是一门大学问呢！。
dna提取中木瓜蛋白酶作用
dna提取中木瓜蛋白酶作用DNA提取是生物学实验中常见的一项重要技术，常用的提取方法包括热水法、硅胶柱法、电泳法、离心管法等。
而在这些方法中，木瓜蛋白酶作用是一种重要的消化酶，可以通过它对细胞膜和核膜进行清洗和切割，从而提高DNA的得率和纯度，以下是对该工作的详细介绍。
一、准备材料和试剂从实验室中准备好需要的材料和试剂，其中需使用的材料有：样品（植物、水果、细胞等）、10%蒸馏水及甲醇混合液、乙醇（75%和100%）、溶液A（0.3mol/L蔗糖、0.1mol/L EDTA、0.1mol/L Tris-HCl）、木瓜蛋白酶液（2%活性）、10%SDS、溶液B（0.25mol/L NaCl、0.1mol/L EDTA、10mmol/L Tris-HCl）、氯仿、异丙醇（IAA）、等体积混合液。
二、样品制备和处理首先将样品在冰箱中放置30分钟后，取出后将其快速淋洗干净。
将样品剪成小块或压碎，添加10%甲醇混合液，搅拌均匀后浸泡5-10分钟，待其完全变软。
随后使用带滤头的玻璃瓶将材料中的液体化作细胞液，去除自主浮在液面上的杂质，并将细胞液放入离心管中。
三、离心和上清液处理将上述样品在离心机中离心10分钟，取出上清液。
将这份上清液上样（取一下即可）到另一个离心管中，并在其中悬浮50μl 2%木瓜蛋白酶液。
放置于水浴中15分钟，制备DNA酶解液。
随后使用枪头将上述酶解液均匀地挤到上清液中，并将其放入离心机离心10分钟，取出上清液即可。
四、上清液加工将上述上清液加入0.15~0.2倍体积的10%SDS溶液，混合均匀，再加入等体积的溶液A，轻轻地摇匀混合。
在样品内加入氯仿一半（如上清液为1mL，氯仿加500μl），轻轻摇晃混合，放置沉淀10分钟。
随后将上层透明液体倒出，并加入等体积的乙醇。
在70-100%浓度范围内，使用旋转振荡器轻轻摇动样品，以观察到白色的DNA沉淀。
放置室温干燥即可得到提纯的DNA。
五、DNA检验将上述提取得到的DNA样品，使用专业生物技术产品进行测量，可以得到DNA的质量、浓度、片段长度等数据，进行后续实验和分析。
木瓜酶活性实验报告
一、摘要本实验旨在通过测定木瓜酶活性，探究温度、pH值、底物浓度等因素对木瓜酶活性的影响。
实验结果表明，木瓜酶活性受温度和pH值的影响较大，且在不同温度和pH值条件下，木瓜酶活性存在显著差异。
此外，底物浓度对木瓜酶活性也有一定影响。
本实验为木瓜酶的工业化应用提供了理论依据。
二、实验目的1. 了解木瓜酶活性的影响因素；2. 探究温度、pH值、底物浓度等因素对木瓜酶活性的影响；3. 为木瓜酶的工业化应用提供理论依据。
三、实验原理木瓜酶是一种蛋白酶，主要来源于木瓜果实。
在一定的温度和pH值条件下，木瓜酶能够催化蛋白质的分解反应。
本实验采用双缩脲法测定木瓜酶活性，通过测定酶催化蛋白质分解反应产生的产物量来反映酶活性。
四、实验材料1. 实验试剂：木瓜酶、双缩脲试剂、pH缓冲液、蛋白质底物（如酪蛋白）；2. 实验仪器：恒温培养箱、pH计、酶标仪、电子天平、移液器、试管等。
五、实验方法1. 木瓜酶活性的测定（1）制备木瓜酶溶液：将木瓜酶用pH缓冲液稀释至适当浓度；（2）制备蛋白质底物溶液：称取适量酪蛋白，用pH缓冲液溶解；（3）设定实验组：将木瓜酶溶液、蛋白质底物溶液和pH缓冲液按一定比例混合，分别设定不同温度（如30℃、40℃、50℃、60℃、70℃）和pH值（如3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0）的实验组；（4）酶活性测定：将各实验组溶液置于恒温培养箱中反应一定时间（如30分钟），然后加入双缩脲试剂，用酶标仪测定吸光度值；（5）计算酶活性：根据吸光度值和标准曲线，计算各实验组的酶活性。
2. 影响因素探究（1）温度对木瓜酶活性的影响：分别测定不同温度下木瓜酶的活性，分析温度对木瓜酶活性的影响；（2）pH值对木瓜酶活性的影响：分别测定不同pH值下木瓜酶的活性，分析pH值对木瓜酶活性的影响；（3）底物浓度对木瓜酶活性的影响：在相同温度和pH值条件下，分别测定不同底物浓度下木瓜酶的活性，分析底物浓度对木瓜酶活性的影响。
酶工程实验指导
广东省高教厅重点实验室——现代生物技术实验室教材酶工程实验技术华南农业大学广东省教育厅现代生物技术重点实验室酶工程分室2007年11月编者的话华南农业大学现代生物技术实验室酶工程分室是由广东省高教厅和华农大投资建设的教学提高型实验室，面向石牌地区六所高校的高年级本科生及硕士、博士研究生开设《酶工程实验技术》课程。
该课程以实验为主，为保证学生在修读本课程时有较好的理论基础，要求所有学生预修“酶工程与蛋白质工程”。
本课程实验内容分酶源的获取、酶制剂分离纯化及分析鉴定、酶制剂的体外改造、酶制剂的应用和酶基因的重组表达五大部分，具体如下：为满足课程教学的需要，经反复修改，特编写了本实验教材。
本实验指导的编写由王炜军，郭振飞，方颖、刘娥娥老师参加编写，在此一并表示感谢！本实验指导为试用第五版，试用后我们将根据各校修课的情况作进一步修改，敬请兄弟院校的同行多提宝贵意见。
编者2006年11月实验一、产淀粉酶菌株的快速筛选一、目的学习和掌握分泌目的酶菌株的基本原理和筛选方法。
二、原理产淀粉酶的菌株能分泌淀粉酶到菌落周围的培养基中，从而水解培养基中的淀粉，由于使用的是经活性染料标记的带颜色的淀粉（本实验为RBV-淀粉，呈鲜艳的紫红色），当其被淀粉酶作用后便形成可溶，且较易扩散的小分水解物，从而在该菌落周围形成颜色较浅的透明圈。
而透明圈直径与菌落直径之比则可反应菌落分泌淀粉酶能力的高低。
本方法有快速、简单易行等优点。
图1 产淀粉酶菌落形成的透明圈三、材料、试剂和仪器1、菌的来源取不同地点的表层土壤。
2、试剂：RBV-Starch（Sigma）, NaNO3, K2HPO4, MgSO4, KCl, 2 mol/L NaOH 无菌水和琼脂粉等。
3、器皿250mL三角瓶两个、9.0cm培养皿若干、涂布棒、200µL移液枪、200µL枪头若干、牙签若干、指形管若干、10mL具塞刻度试管四支、滴管四支、取样器和塑料直尺等。
木瓜蛋白酶的提取与分离纯化的方法
木瓜蛋白酶的提取与分离纯化的方法木瓜蛋白酶（papain）是一种天然的蛋白酶，广泛应用于食品、制药等行业中。
其提取与分离纯化的方法可以分为以下几个步骤：1.选择合适的木瓜品种：不同品种的木瓜蛋白酶活性不同，因此选择具有较高酶活性的木瓜品种对提取纯化效果至关重要。
2.酶源准备：将选好的木瓜切成小块，去掉果肉，保留果实中的细胞浆和硬实质。
然后将木瓜块浸泡于缓冲液中，以提取木瓜蛋白酶。
3.离心分离：将浸泡木瓜块的混合液进行离心分离，以去除果肉等杂质，得到较为纯净的木瓜蛋白酶液。
4.澄清液处理：将离心分离得到的液体通过滤纸或滤膜进行澄清，去除悬浮的固体颗粒。
5.蛋白酶的分离：通过离心、超滤、透析等手段，将木瓜蛋白酶与其他蛋白质分离，得到较为纯净的蛋白酶液。
6.结晶纯化：可以采用醇沉淀、浓缩、结晶等方法对蛋白酶进行纯化。
其中，醇沉淀方法是常用的分离纯化方法之一，通过醇的添加，使蛋白酶蛋白质聚集并沉淀下来，然后进行洗涤、溶解等操作，最终得到纯净的木瓜蛋白酶。
7.洗脱：将获得的木瓜蛋白酶溶解于缓冲液中，使其达到所需的适宜酶活性和稳定性。
8.酶活性测定：用适当的方法测定提取分离纯化后的木瓜蛋白酶的活性，以确定其纯化程度和活性。
需要注意的是，木瓜蛋白酶的提取与分离纯化过程中，应注意保持温度、pH值等参数的控制，以防止酶的失活或蛋白质的降解。
同时，在纯化过程中需要使用无菌操作，以防止细菌、病毒等污染物的引入。
总结起来，木瓜蛋白酶的提取与分离纯化的方法包括酶源准备、离心分离、澄清液处理、蛋白酶的分离、结晶纯化、洗脱和酶活性测定等步骤。
通过合理的步骤设置和操作，可以得到较为纯净、高活性的木瓜蛋白酶，以满足工业和科研的需求。
木瓜蛋白酶的提取纯化实验报告
木瓜蛋白酶的分离纯化一、目的（1）它是利用未成熟的番木瓜（Carica papaya）果实中的乳汁中提取粗酶液，并进一步纯化，获得高纯度的木瓜蛋白酶。
（2）通过此次试验，熟悉掌握木瓜蛋白酶分离纯化的基本步骤和原理，了解离心分离，萃取等实验技术。
二、原理木瓜蛋白酶（ Papain ）是一种巯基蛋白酶，它分解比胰脏蛋白水解酶更多、更广泛的蛋白底物。
它也具有脂酶活力。
其分子量约为 23000 左右。
在 25 ℃ , pH6.2 时， 1 分钟生成1umol酪氨酸的酶量为 1 单位。
木瓜蛋白酶是单条肽链，有 211 氨基酸残基折叠成两部分形成裂缝，酶分子只有 1 个巯基，对酶活力是必需的，激活剂有半胱氨酸，硫化物，亚硫酸盐和 EDTA ；抑制剂有巯基试剂，包括重金属和羧基试剂和过氧化氢。
酪蛋白是一种蛋白质，它被木瓜蛋白酶降解生成的酪氨酸在紫外光区275nm 处有吸收峰，根据测定 275nm 处的吸收值，可以判定木瓜蛋白酶的酶活力。
吸收值的大小与酪氨酸含量的多少有关，吸收值大说明酪氨酸含量高，也就是说木瓜蛋白酶分解的酪蛋白多，酶活力高。
三、实验材料番木瓜汁；PEG (聚乙二醇，分子量为6000)； (NH4)2SO4；三氯乙酸(TCA)；酪氨酸；考马斯亮蓝四、仪器设备（ 1 ）离心机 4000-1000rpm （冷冻式或非冷冻式）（ 2 ） 752 紫外分光光度计（ 3 ）水浴箱（ 4 ）冰箱（ 5 ）榨汁机五、玻璃器皿（以组为单位）试管（ 6 ）， 100 mL 烧杯（ 2 ），吸管（ 1 ）、玻棒（ 1 ），试剂瓶（ 1000 mL 、 500 mL 、 250 mL 等），移液管或移液器5mL(1) 、 1mL(2) 、 0.5mL （ 1 ），漏斗（ 3 ），滤纸（ 3-6 ）等六、实验试剂配制及实验步骤（一）酪氨酸的标准曲线将上述各管混匀，静置2min, 测定各管的A 275nm，做标准曲线，曲线如下：（二）粗酶活测定1 试剂（ 1 ） 3mg/ml 木瓜蛋白酶液（用 0.1mol/L 的磷酸缓冲液， pH 7.2 配制）（ 2 ）0.1mol/L 的磷酸缓冲液， pH 7.2（ 3 ）用 0.1mol/L 磷酸缓冲液（ pH 7.2 ）配制含 80mmol/L 半胱氨酸（ 4 ）1% 酪蛋白溶液：用 0.1mol/L 磷酸缓冲液（ pH 7.2 ）配制（ 5 ）15% 三氯乙酸（ TCA ）溶液2 方法量取酶液0.2 mL，加入激活剂0.25 mL于带塞试管中，在37℃水浴中保温8 min，吸取预热37℃酪蛋白液（质量分数为1%）1 mL加入此管，在37℃水浴中反应10 min，加入三氯乙酸（TCA）2 mL摇匀，静置5 min；另取样液（已激活）0.3 mL置另一带塞试管中，加入TCA 2 mL，37℃保温10 min后，加入预热至37℃的酪蛋白液1 mL，静置5 min，测2个管的A275 nm值，同时做2个平行试验。
蛋白酶凝乳特性研究试验指导书10
“蛋白酶凝乳特性研究”实验指导书指导教师：刘海臣1.实验目的通过研究胃蛋白酶、木瓜蛋白酶作用于脱脂乳的最适凝乳温度、最适pH值、以及金属离子对酶凝乳效果的影响，使学生掌握酶学研究的基本方法，从而掌握生物化工研究的一些基本理论和主要思路，为科研开发打下必要的基础。
2.实验原理胃蛋白酶、木瓜蛋白酶等具有很强的蛋白质催化特性，又具有良好的凝乳特性。
因脱脂乳含大量酪蛋白，木瓜蛋白酶的凝乳特性主要表现为随机切割精氨酶-苯丙氨酸的肽键，达到破坏蛋白质稳定的效果，进而发生凝乳。
奶酪的生产以前主要利用牛凝乳酶达到凝乳效果，但牛凝乳酶主要是从小牛的第四胃中提取得来，其来源受到极大的限制，通过研究蛋白酶、木瓜蛋白酶的凝乳特性并对其进行优化，一定程度地缓解凝乳酶来源的紧缺状态。
3.实验材料、仪器和试剂3.1实验材料优质脱脂乳3.2实验药品和器皿3.3试剂（1）配制浓度为100g/L的脱脂乳1000ml,混匀后待用。
（5组）（2）配制浓度为10g/L的木瓜蛋白酶液和浓度为2g/L胃蛋白酶溶液各500ml，混匀后待用。
（5组）（3）配制0.1mol/L NaOH和0.1mol/L的HCl溶液各1000ml,用于调节溶液pH值。
（5组）4.操作步骤4.1木瓜蛋白酶（胃蛋白酶）凝乳活力的测定取 5mL100g.L-1的脱脂乳,在65℃下保温5min,加入0.5mL10g.L-1的木瓜蛋白酶液（或胃蛋白酶液）,迅速混合均匀,准确记录从加入酶液到乳液凝固的时间(s)。
把40min凝固1mL100g.L-1的脱脂乳的酶量定义为一个索氏单位(Soxhletunit),并以相对活性(RU)表示各因素的影响效果。
SU=（2400/T）×（5 / 0.5）。
式中:T 为凝乳时间(s)RU(％)=（各因素下SU / 最大SU）×1004.2酶的最适凝乳温度的测定：分别在55,60,65,70, 75℃下测定酶凝乳活性。
4.3酶的热稳定性：酶液分别在55 ，60，65,70,75℃下处理10,30,60min后,测定酶的凝乳活性。
木瓜蛋白酶的提取
木瓜蛋白酶的提取、分离纯化及其生物学研究综述及实验方法13生物技术第二大组第二小组组员：王玓玥（组长）、王子贺、王思瑶、王宇涛、王守鑫、谭国栋一、研究背景：在经济飞速发展的今天，人们的生活水平已远远不只在于吃饱穿暖，食品的安全和营养问题受到人们越来越多的关注，绿色健康的生活也成为大家共同的追求,木瓜蛋白酶以它自身耐热及特殊结构等特点被广泛的用于食品行业，如何分离纯化得到高纯度低成本的木瓜蛋白酶则是人们现在研究的重点，本小组便也以此为研究主题展开实验。
二、木瓜蛋白酶基本介绍：木瓜蛋白酶，又称木瓜酶，是一种蛋白水解酶.木瓜蛋白酶是番木瓜中含有的一种低特异性蛋白水解酶,广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富.木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶,它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点，这种蛋白水解酶,分子量为23406，由一种单肽链组成,含有212个氨基酸残基.至少有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位，他们分别是Cys25、His159和Asp158，当Cys25被氧化剂氧化或与金属离子结合时,酶的活力被抑制，而还原剂半胱氨酸（或亚硫酸盐)或EDTA能恢复酶的活力木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。
它的外观为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性；木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液为无色或淡黄色,有时呈乳白色;几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。
木瓜蛋白酶是一种含巯基（-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力,但几乎不能分解蛋白胨。
木瓜蛋白酶的最适合PH值6~7（一般3～9.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用,等电点（pI）为8。
75；木瓜蛋白酶的最适合温度55～65℃(一般10～85℃皆可）,耐热性强，在90℃时也不会完全失活;受氧化剂抑制，还原性物质激活. 。
另外六个半胱氨酸残基形成了三对二硫键，且都不在活性部位。
酶学实验
实验一、木瓜蛋白酶活性测定实验(明胶法)(一)实验原理木瓜蛋白酶从明胶中分解出氨基酸和肽，其氨基型氮可用甲醛复分解，产生氢离子，浓度可用氢氧化钠溶液滴定。
(二)定义一个木瓜蛋白酶单位相当于在规定条件下分解1ug分子量的肽键时所需的酶量。
(三)试剂1. 底物明胶2. 柠檬酸盐缓冲液(pH5.0) 取70.000g一水柠檬酸溶于720mL 1mol/L氢氧化钠溶液中。
用1mol/L氢氧化钠溶液将pH调至5.0，用蒸馏水定容至1000mL。
3. 37%甲醛溶液4. 酚酞溶液取0.5g酚酞溶于95%的乙醇中，并定容至50mL。
5. 0.1mol/L氢氧化钠溶液取4.0克氢氧化钠置于洁净干燥的烧杯中，加纯水稀释、搅拌溶解，将溶液移入1000ml洁净容量瓶中定容至刻度。
6. 酶溶液用蒸馏水溶解酶，每毫升配制溶液应含有40U左右。
酶的称量一定得按以下原则确定：用于主值和空白值试验的耗量之差应在1.8～2.2mL这一范围内。
此外需用一个合适的称量重复测定几次。
(四)操作步骤称取500mg明胶放入一只100mL锥形烧瓶内，加8mL蒸馏水，加热后明胶溶解。
待明胶完全溶解加2.0mL柠檬酸盐缓冲液，置于水浴中冷却至40℃。
加5.00mL已预热至40℃的酶溶液，于40℃下保温60min，加10.0mL甲醛溶液终止反应。
加0.5mL酚酞溶液后用0.1mol/L氢氧化钠溶液滴定，直至第一次出现明显的粉红色为终点。
用同样方法测定空白值，只是这里在添加酶溶液之前先添加甲醛溶液。
在空白值测定方面耗去大约5mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液。
(五)计算用以下公式计算酶活性：酶活力(U/mg)=(H-B)/E W×100式中：H-用于主值的滴定耗量(mL)；B-用于空白值的滴定耗量(mL)；100-相当于1mL0.1mol/L氢氧化钠溶液；E W-每5.0mL所用酶液中含有酶的重量(mg)。
举例：测定一个木瓜蛋白酶样品。
从样品中称取68.2mg，定容100mL。
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