脂肪氧化酶(LOX)活性体外测定方法研究
【摘要】：炎症是指机体对感染、外来物质或其他原因(如抗原抗体复合物)所致损伤的一种反应。目前研究植物水提取液抗炎活性实验方法主要有两种:一种是活体动物实验;另一种是细胞实验。但这两种方法都存在费时、费力且花费大的弊端。而分光光度法是近年来较为常用的体外抗炎方法,利用LOX活性来表征纯化合物的抗炎效果,但该方法在药用植物水提液方面应用较少,且有研究表明其检测出的结果不理想且重现性差,所以,在此基础上本文对分光光度法进行进一步的修改和完善,以填补目前LOX活性表征药用植物水提液抗炎效果的空缺。以肉桂、茵陈蒿、淫羊藿等18种药用植物按料水的质量体积比1:20获得的水提液为试验材料,通过检测水提液为0.5mg/μL生药浓度时,对LOX活性的抑制程度来体现其抗炎活性,利用紫外分光光度法检测药用植物水提液与LOX催化底物亚油酸反应生成的共轭二烯量在234 nm处的吸光度值,推算出酶活力。结果表明:1)18种药用植物水提液的抗炎率在1.13%~96.06%之间,其中石榴皮、厚朴、迷迭香、蚊子草、泽漆和肉桂水提液的LOX活性抗炎率都在80%以上;而甘草、白术和牛膝这三种植物药材水提液的抗炎率都在10%以下。2)以迷迭香水提液为例,评价该检测方法的精密度和重复性,经四次独立平行试验,发现该方法的RSD(相对标准偏差)为1.17%(<2.0%)。3)以厚朴水提液为例,对药用植物水提液的抗炎活性进行精准定量,通过倍比稀释试验,发现在一定浓度范围内,水提液浓度的1 g值和抗炎率间存在良好的线性关系,相关系数R~2值为0.958 7,厚朴水提液的抗炎活性IC_(50)值为22.38μg/μL。以上结果提示,通过体外检测LOX的活性变化可以表征药用植物水提液的抗炎效果,该试验方法相较于以往抗炎活性实验方法中常用的活体动物实验和细胞实验,具有简单、直接、快速、结果稳定且花费较低等优点,整个检测过程可在1 h内完成,并可精准定量水提液的抗炎活性浓度,尤其适用于多种水提液的初筛工作。
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