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酵母菌液体发酵生产β

引言
β-半乳糖苷酶( β-galactosidase),又称乳糖酶(Lactose),广泛存在于多种动物、植物及微生物中,是一种白色粉末,无味,溶解后是一种浅棕色液体。乳糖酶位于小肠空肠段黏膜上皮细胞的刷状缘,催化β肠粘膜绒毛的β-半乳糖苷酶发生先天基因缺陷时或后天障碍,则发生乳糖消化不良性腹泻,其特性是粪便中水分、乳糖量和乳酸量增长、pH值减少等[10]。
由于β-半乳糖苷酶的作用越来越重要,为了将其实现工业化,人们做了大量的研究。β-半乳糖苷酶广泛存在于多种动物、植物及微生物中,但由于微生物的迅速生长和高效代谢的生物学特性,使其成为工业化酶制剂的重要来源。运用微生物发酵法制取β-半乳糖苷酶、酶源丰富、产量高、 生产成本低、周期短,并且不受季节、地理位置等因素的影响。微生物生产β-半乳糖苷酶涉及:(1)细菌β-半乳糖苷酶,特别是嗜热细菌产生的酶正得到广泛的研究。到目前为止,大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶研究得最彻底、最进一步,并已大量用于生化分析中。细菌产生的β-半乳糖苷酶是胞内酶,在培养过程中不能分泌到培养基中,它的耐热性较高,这一点有助于固定化酶的制造。但因产量低及也许的毒性问题,迄今未用于工业化生产;(2)霉菌产生的β-半乳糖苷酶是胞外酶,可以用固态培养,也可以采用液态深层培养来生产。在培养过程中,酶分泌到培养基中,提取较为以便。霉菌产生的β-半乳糖苷酶较耐热、耐酸,不需要活化剂和稳定剂,稳定性较高。目前应用较多的霉菌β-半乳糖苷酶产生菌重要是米曲霉(Aspergillus) 和黑曲霉(Aspergillus niger),但其生长周期比酵母菌较长;
(3)酵母菌是一类在食品医药工业中应用已久的微生物种群,酵母菌产生的β-半乳糖苷酶一般是胞内酶,制备纯品必须破碎细胞。该酶对酸、热较不稳定,当某些离子存在时,才有最大活性,因此不适于在工业上进行应用。但是,酵母菌容易培养,在深层培养条件下可以大量生成β-半乳糖苷酶,这些长处掩盖了它的局限性,故酵母菌产生的β-半乳糖苷酶才得以成功地进行开发[11-13]。酵母菌中有乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)和脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)。
随着酶学研究的不断进一步和酶工程的发展,工业化生产的酶越来越多,酶的应用越来越广泛。但在酶的使用过程中,人们也注意到酶的某些局限性之处。例如:(1)酶的稳定性差,在温度、pH值和无机离子等外界因素的影响下,容易变性失活;(2)酶一般都是在水溶液中与底物反映,这样酶在反映系统中,与底物和产物混在一起,反映结束后,虽然酶仍有较高的活力,也难于回收运用。这种一次性使用酶的方式,不仅使成本较高,并且难于持续化生产;(3)酶反映后成为杂质与产物和混合在一起,无疑给进一步的分离纯化带来一定的困难。为此,人们针对酶的局限性之处谋求其改善措施。其措施之一就是固定化酶。固定化酶既保持了酶的催化特性,又克服了游离酶的局限性之处,具有增长酶稳定性、可反复使用、易与反映物分离等特点[14]。固定化乳糖酶对于大规模工业生产来说,虽然游离的乳糖酶水解乳糖工艺简朴,但是由于添加乳糖酶会使牛奶掺入外来蛋白质,此外乳糖不耐受症患者又不喜欢乳糖酶分解乳糖后导致甜味增长,而固定化酶则可以避免以上问题。固定化酶是指在载体上并在一定空间范畴内进行催化反映的酶。固定化措施诸多,重要有吸附法、包埋法、结合法、交联法和热解决等措施[11]。虽然对于固定化乳糖酶水解体系已有诸多研究,但只有很少一部分应用被放大,更少达到工业化或半工业化水平。鉴于这种状况,还需解决如下问题,以使固定化乳糖酶体系用于实际生产。(1)筛选和哺育活力高、耐热性较高的乳糖酶及微生物;(2)开发无毒性、机械强度高的载体;(3)酶活高、半衰期长的固定化措施的开发;(4)反映器的清洗和杀菌措施的开发;(5)扩大酶的应用领域,谋求新的调制措施,如东北农业大学应用透性化乳糖酶固定于中空纤维膜反映器上,%,,具有工业化的应用价值。
随着国内经济的迅速增长,牛奶及其他乳制品被越来越多的人作为主流早餐。乳糖酶缺少和乳糖不耐受影响着世界不同地区、不同种族的人们对乳制品的摄人,发生率为30%~100%。在西方国家,乳制品摄入量较高,乳糖消化吸取和营养作用受到高度注重,乳糖酶缺少和不耐受的宣传非常广泛;在的提高和乳制品摄入量的提高,这一问题刚刚引起人们的注重。虽然人们已经结识到牛奶是最完美的天然饮食,但是却有诸多人由于体内缺少乳糖酶而不能充足运用它,乳糖酶的浮现使这一问题迎刃而解,乳糖酶在乳品工业中愈来愈多的使用也正阐明了这一点[15]。迄今为止,国内乳制品工业使用的乳糖酶所有依赖进口,且价格昂贵

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