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油茶叶提取物抑制皮脂分泌的应用

泰然健康网
2024-12-27 15:02

油茶叶提取物抑制皮脂分泌的应用

本发明涉及油茶叶提取物在抑制皮脂分泌方面的应用。

背景技术：

油茶叶是油茶(camelliaoleiferaabel)的叶子，油茶叶活性物质极其丰富，但目前的理论研究范围较小，主要集中在多酚、黄酮类化合物的提取以及抗氧化、抗凝血功能研究。油茶树在幼龄期进行修剪整形以及每年春末夏初间打叶会产生的大量油茶叶，目前还没有得到充分利用，油茶叶的工业化生产应用更是处于零发展，这些油茶叶一般被当做废物丢弃或者焚烧，造成资源的严重浪费，若能合理利用油茶叶，则可提高综合利用率减少废弃，进而可以提高油茶的经济效益促进整个油茶产业的发展。

油茶籽提取物通常是指用经过榨油以后剩下的物质进行提取得到的产物，油茶籽榨油后也称为油茶籽饼粕，其中含有茶皂素20％～25％，多糖18％～20％，蛋白质15％～20％，目前从油茶籽油茶籽饼粕提取茶皂素的研究和产业化应用已经较为成熟。茶皂素属于三萜类皂素，茶皂素的主要功效：(1)溶血和鱼毒作用(2)抗菌功能(3)抗氧化功能(4)降血压功能(5)杀虫、驱虫功能(6)清洁、洗涤功能。因此单一茶皂素并未有抑制5α还原酶、祛痘的功能报道。

2020110294878的发明《一种具有多靶点头皮控油去屑功效的植物提取物组合物、其制备方法及头皮护理组合物》告知了由20～40％油茶籽提取物、15～25％茶麸多糖、10～30％柑橘果皮提取物、10～30％桉叶提取物、1～20％苦参提取物组成的组合物，通过四种不同途径(抑制微生物脂肪酶、抑制马拉色菌β-碳酸酐酶、抑制头皮细胞中的5α-还原酶以及抑制痤疮丙酸杆菌)实现多靶点控油和去屑目的。

201610382702x的发明《一种应用油茶籽粕提取液的祛痘修复面膜及其制备方法》的组分中含有油茶籽油、油茶籽粕提取液、尿囊素，面膜有利于皮肤表皮毒素的排出、自由基的消除，同时起到增强肌肤免疫力、改善肌肤新陈代谢、抑制痤疮复发、强化肌肤修复机能的功效。

2011100743354的发明《油茶蒲提取物的用途》告知了：油茶蒲提取物的用途，作为5α-还原酶抑制剂，用于制备治疗前列腺增生的药物，用于制备治疗前列腺癌的药物，用于制备治疗痤疮的药物或日化产品，或者用于制备治疗雄激素依赖性脱发的药物或日化产品。

技术实现要素：

本发明要解决的问题是提供一种油茶叶提取物的新用途。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种油茶叶提取物抑制皮脂分泌的应用。

作为本发明应用的改进：制备用于抑制皮脂分泌的药物。

本发明的油茶叶提取物的用法和用量为：

口服：一般为4～9g/人.天；涂抹：一般为0.5～1.5ml/人.天。

本发明将油茶叶与皮脂腺分泌联系在一起，探究油茶叶抑制皮脂腺的分泌作用，为油茶叶提供一种新的的研究方向和大势所趋的商品化路径，探索其在相关食品、保健品、药品领域的应用，以及在洗护、护肤等日化领域作为功能配料的应用，从而扩大油茶叶的研究应用范围。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1为金黄地鼠皮脂腺斑面积变化；

图2为灌胃cole对金黄地鼠左右皮脂腺斑面积的影响；

图2中，

a为灌胃组左侧皮脂腺斑面积，b为灌胃组右侧皮脂腺斑面积。

*p<0.05表示g-lc、g-hc、g-tan与g-con比较；

图3为外涂cole凝胶对金黄地鼠左右皮脂腺斑面积的影响；

图3中，

a为外涂组左侧皮脂腺斑面积，b为外涂组右侧皮脂腺斑面积；

#p<0.05表示a-cole、a-tan与a-con比较；

图4为药物对金黄地鼠皮脂腺斑组织形态显微结构的影响；

图5为油红o染色法检测各药物对皮脂腺斑中脂质积累的影响；

图6为灌胃cole对金黄地鼠血清sod、cat活力及mda含量的影响；

*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001表示g-lc、g-hc、g-tan与g-con比较；#p<0.05；

图7为灌胃cole对金黄地鼠局部皮脂腺斑组织sod活力、cat活力、mda含量的影响；

图7中，

a为皮脂腺组织sod活力，b为皮脂腺斑组织cat活力，c为皮脂腺斑组织mda含量；

*p<0.05表示g-lc、g-hc、g-tan与g-con比较；

图8为外涂cole凝胶对金黄地鼠皮脂腺斑组织sod活力、cat活力及mda含量的影响；

图8中，

a为皮脂腺组织sod活力，b为皮脂腺组织cat活力，c为皮脂腺组织mda含量；

#p<0.05表示a-cole、a-tan与a-con比较；

图9为灌胃cole对金黄地鼠血清中甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸的含量影响；

图9中，a为血清tg含量，b为血清tc含量，c为血清nefa含量；

*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001表示g-lc、g-hc、g-tan与g-con比较；

图10为灌胃cole对金黄地鼠皮脂腺斑组织中甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸的含量的影响；

图10中，

a为皮脂腺斑组织tg含量，b为皮脂腺斑组织tc含量，c为皮脂腺斑组织nefa含量；

*p<0.05表示g-lc、g-hc、g-tan与g-con比较；

图11为外涂cole凝胶对金黄地鼠皮脂腺斑组织中甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸的含量影响；

图11中，

a为皮脂腺斑组织tg含量，b为皮脂腺斑组织tc含量，c为皮脂腺斑组织nefa含量；

#p<0.05表示a-cole、a-tan与a-con比较。

图12为灌胃油茶蒲50％乙醇提取物(g-hfh)对金黄地鼠左右皮脂腺斑面积的影响；

图12中，

a为灌胃组左侧皮脂腺斑面积，b为灌胃组右侧皮脂腺斑面积。

*p<0.05表示g-hfh、g-tan与g-con比较；

图13为外涂18％油茶蒲50％乙醇提取物(a-fh)对金黄地鼠左右皮脂腺斑面积的影响；

图13中，

a为外涂组左侧皮脂腺斑面积，b为外涂组右侧皮脂腺斑面积；

#p<0.05表示a-fh、a-tan与a-con比较。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：50％乙醇油茶叶提取物的制备(常规技术)：

经过挑选获得叶片完整无损，颜色正常的油茶叶，将该油茶叶热风干燥(50℃的低温烘干)至含水率约为10％，粉碎过60目，称取20g油茶叶粉末按1:40(w:v，1g/40ml)料液比加入50％乙醇溶液先搅拌浸泡3h，再在50℃下超声震荡提取2h(提取两次)，4000rpm离心10min使得固液分离，采用旋转蒸发的方式减压浓缩上清液从而除去有机试剂(乙醇)，然后真空冷冻干燥(10pa的真空度、-70℃，干燥时间为48小时)提取物至干粉(含水率＜6.0％)，得到油茶叶提取物(50％乙醇油茶叶提取物)，命名为cole。

实施例2、外涂凝胶的制作：

称取1g卡波姆940置于20ml蒸馏水中，磁力搅拌器搅拌过夜(约10～12小时)，得ⅰ相；称取甘油8g、丙二醇12g，磁力搅拌器搅拌条件下加入至ⅰ相中，搅拌均匀，得ⅱ相；

称取50％乙醇油茶叶提取物18g溶于25ml无水乙醇中，加入ⅱ相中，搅拌均匀，得ⅲ相；称取3g氮酮、0.35g咪唑烷基脲加入ⅲ相中，搅拌均匀，用适量三乙醇胺调ph值为6～7，加蒸馏水至总质量为100g，使用磁力搅拌器充分搅匀，脱气泡，直至形成凝胶，该凝胶命名为cole凝胶。

实验1：50％乙醇油茶叶提取物内服及外涂对皮肤细胞中抑制皮脂分泌方面的应用。

方法：

金黄地鼠：spf级健康lvg叙利亚金黄地鼠(lvggoldensyrianhamsters)49只7周龄(金黄地鼠6周性成熟，8周体成熟)，体重120±20g：由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号为scxk(京)2016-0011；

金黄地鼠是研究药物对皮脂腺影响的理想动物模型，其背部有2个天然的皮脂腺斑，不需要人工处理造模。

采用“灌胃”cole和“外涂”cole凝胶两种给药方式分别探究对金黄地鼠皮脂腺斑的改善作用。

1.灌胃实验动物分组

spf级雄性金黄地鼠28只，7周龄(金黄地鼠6周性成熟，8周体成熟)，体重100±20g购自北京维通利华实验动物技术有限公司。将这28只金黄地鼠随机分成4组，每组7只(每组分2笼饲养)。根据实验需求分为0.5％cmc-na灌胃组(空白对照组)、cole低剂量灌胃组、cole高剂量灌胃组、丹参酮胶囊灌胃组(阳性对照组)。

说明：cmc-na为羧甲基纤维素钠，丹参酮胶囊通过常规的市购方式获得。

表1、实验动物分组以及给药情况

2.外涂实验动物分组

与上述条件相同的spf级雄性金黄地鼠21只，将其随机分成3组，每组7只(每组分3笼饲养)。根据外涂实验要求分为空白凝胶外涂组(空白对照组)、cole凝胶外涂组、克痤隐酮凝胶外涂组(阳性对照组)。

空白凝胶(基质凝胶)：取消实施例2中50％乙醇油茶叶提取物的使用，即，用量为0，将等量的水代替cole，其余等同于实施例2。

克痤隐酮凝胶：市购获得。

表2、实验分组与给药

3.动物饲养与处理

将购买的金黄地鼠置于光照12h及黑夜12h并保持20℃恒温的人工环境中以标准词料喂养，适应性饲养1周之后，无不良反应，饮食、饮水、活动正常者纳入实验。进入实验后，分笼放置，日进食2次，自由饮水。

实验前使用电动剃须刀将金黄地鼠背部双侧的毛剃除，使得背部皮肤表面的皮脂腺斑清晰地露出，给各个实验组金黄地鼠注射戊巴比妥钠进行麻醉，在强光辅助下，使用游标卡尺测量每只金黄地鼠背部左侧与右侧皮脂腺斑的最大横径(dt)和最大纵径(dl)，计算皮脂腺斑的面积，并拍照记录。

s＝dt×dl(mm2)

式中s代表皮脂腺斑面积，dt、dl分别代表最大横径最大纵径。

进入正式试验之后，对于灌胃组实验每天上午8:30灌胃给药，连续给药4周，每天1次，灌胃量为0.02ml/g。药物临用时配制，将cole冻干粉末和丹参酮药粉用0.5％cmc-na溶液(质量浓度为0.5％的羧甲基纤维素钠溶液)稀释制成悬浮液，空白对照组则以同等体积的0.5％cmc-na溶液灌胃。

对于外涂组实验每天上午、下午外涂给药，连续给药4周，每天2次，外涂量为0.6ml/d。

每天观察记录大鼠一般状况(活动是否正常，有无腹泻状况，进食量，粪便形态等)大鼠死亡情况以及皮脂腺斑状况(涂药部位无脱屑、角化过度、红肿、皮肤出现裂纹或者其他不良反应)并按照新药临床前指导原则的皮肤刺激性反应评分标准记录观察结果评判。每周称量并且记录各个实验组的金黄地鼠体重和皮脂腺斑面积数据，并及时清理背部新长出的毛发。

评判标准：gb17149.3-1997化妆品痤疮诊断标准及处理原则，db37t3744-2019化妆品不良反应皮损形态判断标准及处理。

金黄地鼠作为研究药物对皮脂腺影响的理想动物模型，通过观察其背部两侧皮脂腺斑的表观形态，测定比较皮脂腺斑面积大小，探究药物对金黄地鼠皮脂腺斑的影响。所述结果如图1所述；展示第0d，第14d，第28d不同给药方式(cole以及cole凝胶)金黄地鼠皮脂腺斑的变化。

0.5％cmc-na灌胃组(即，空白对照组，g-con)和空白凝胶外涂组(a-con)皮脂腺斑的大小和颜色在实验期间内并未发生显著性变化，该处皮肤毛孔粗大清晰可见，内含色素性(黑色)粗毛，部分皮脂腺斑周围有灰色晕环，是黑色素细胞分泌黑色素的结果。

与0.5％cmc-na灌胃组相比，可见低剂量cole灌胃组(g-lc)、高剂量cole灌胃组(g-hc)和丹参酮胶囊灌胃组(g-tan，即，阳性对照组)皮脂腺斑变浅，皮脂腺斑与周围皮肤交界处逐渐模糊，斑点突起范围缩小。

与空白凝胶外涂组(a-con)相比，cole凝胶外涂组(a-cole)与克痤隐酮凝胶外涂组(a-kcyt)的皮脂腺斑随着给药时间的延长也呈现颜色变浅的趋势。

金黄地鼠皮脂腺斑面积变化结果(每组平均结果)，如图2、图3所示，第零周为适应性饲养并未给药，各组皮脂腺斑无显著性差异(p＞0.05)。自第一周开始给药，对于灌胃组第一周第二周各组左右侧皮脂腺斑面积变化依旧不明显(p＞0.05)，从第三周和第四周药物作用开始显现，与空白灌胃组(g-con)相比，低、高剂量的cole与阳性药物均显著使皮脂腺斑面积缩小(p＜0.05)如图2所示。

对于外涂组左侧皮脂腺斑，与空白凝胶外涂组相比，从第二周开始出现显著性差异(p＜0.05)，这种情况一直延续到第四周，右侧皮脂腺斑从第三周开始出现组间差异，cole组皮脂腺斑面积显著小于空白组(p＜0.05)。即，外涂组从第二周起cole凝胶使得左侧皮脂腺斑面积显著减小(p＜0.05)，右侧皮脂腺斑面积从第三周开始显著减小。如图3所示。

说明灌胃和外涂均可显著缩小皮脂腺斑面积。即，证明cole抑制皮脂腺发育的作用，进而抑制皮脂分泌。

实验2、cole对金黄地鼠皮脂腺斑组织病理学的影响

采用he染色观察cole对金黄地鼠皮脂腺斑组织病理学的影响(如图4)。

皮脂腺为泡状腺，由一个或几个囊状的腺泡与一个共同的短导管构成。腺泡周围为幼稚细胞，该细胞具有活跃的分裂能力，可生成新的腺细胞。新生的腺细胞渐变大，并向腺泡中心移动，在胞质中可分泌越来越多的小脂滴。

如图4所示，各给药组金黄地鼠局部皮脂腺斑组织显微结构变化情况。图4中：g-con：灌胃空白对照组；g-lc：cole低剂量灌胃组；g-hc：cole高剂量灌胃组；g-tan：丹参酮胶囊灌胃组(阳性对照组)；a-con：空白凝胶外涂组；a-cole：cole凝胶外涂组；a-kcyt：克痤隐酮凝胶外涂组。

g-con和a-con的皮脂腺呈现分叶状分布，腺叶大且饱满，重叠叶数多，排列紧密，内部囊状腺泡丰富，呈多边形，周围腺细胞繁多。与g-con相比，低、高剂量cole和丹参酮胶囊组的皮脂腺泡明显减少且排列松散，腺体收缩变小，呈现梭状，腺体内部囊状腺泡和周围腺细胞均较少。与a-con相比，cole凝胶与克痤隐酮凝胶也可明显减小皮脂腺泡数量和体积，这说明灌胃和外涂两种给药方式使用cole均具有抑制金黄地鼠皮脂腺的作用。

即，发现实验1所述的灌胃和外涂两种给药方式使用cole使得金黄地鼠皮脂腺数量减少且排列松散，腺体收缩变小，有的呈现梭状，腺体内部囊状腺泡和周围腺细胞均减少。该结果与实验1皮脂腺斑面积减小的结果一致。

实验3、cole对金黄地鼠皮脂腺斑脂质分泌的影响

采用油红o染色观察cole对金黄地鼠皮脂腺斑脂质分泌的影响，如图5。

通过油红o染色的方式观察各组皮脂腺脂质分泌情况。如图5所示，g-con和a-con组金黄地鼠皮脂腺斑组织内皮脂腺细胞胞浆内部明显可见大量团状红色脂滴，且融合成片状，脂滴分泌旺盛。与g-con组相比，g-lc、g-hc、g-tan组腺泡周围橘红色脂滴积累明显减少。与a-con组相比，a-cole与a-kcyt组的皮脂分泌也有下降趋势。

即，根据图5可得知：灌胃cole和外涂cole凝胶可以减少金黄地鼠皮脂腺腺泡周围橘红色脂滴积累，使皮脂腺斑组织内的脂质分泌水平下降。

实验4、cole对金黄地鼠体内以及皮脂腺斑组织生化指标影响

采用酶联免疫等方法，研究cole对金黄地鼠体内以及皮脂腺斑组织氧化应激(sod、cat活力以及mda含量)、脂质分泌水平(包括甘油三脂、胆固醇、游离脂肪酸)的影响。

(1)氧化应激指标

对于灌胃组金黄地鼠，其体内氧化应激指标的结果表明对于低，高剂量cole可以显著提高血清内sod活力(p<0.05，p<0.01)，cat活力显著增加(p<0.05，p<0.05)，对应氧化应激产物mda含量均极显著减低(p<0.001，p<0.001)，如图6。灌胃组金黄地鼠局部皮脂腺斑组织sod活力和cat活力呈上升趋势，g-hc组使mda含量显著下降(p<0.05)，如图7。说明灌胃cole可以显著减缓了机体内部受到自由基攻击的严重程度。

对于外涂组，cole凝胶使得金黄地鼠局部皮脂腺斑组织sod活力显著增加(p<0.05)，mda含量显著下降(p<0.05)，cat活力有上升趋势且优于阳性药物，说明cole凝胶抗氧应激的能力突出，能够起到保护皮肤的作用，如图8。

(2)脂质分泌指标：

低、高剂量cole可以显著降低灌胃组金黄地鼠血清中tg含量(p＜0.001，p＜0.001)、nefa含量(p＜0.001，p＜0.001)、高剂量cole可以显著降低tc含量(p＜0.05)，如图9。同时可极显著降低金黄地鼠皮脂腺斑组织中tg(p＜0.001)和nefa(p＜0.001)。灌胃cole的效果与阳性对照的效果相当。皮肤表面胆固醇含量较少，约占皮脂2％，tc的含量虽然略有降低趋势，但并无显著性变化(p＞0.05)如图10所示。该指标结果说明灌胃cole不仅可以降低体内血清脂质类成分含量，还可降低金黄地鼠皮脂腺斑皮脂含量，且结果趋势基本一致。

对于外涂方式给药的实验组，cole凝胶外涂组金黄地鼠皮脂腺斑组织中tg和nefa的含量均极显著下降(p＜0.01，p＜0.01)，两者的结果相当。这说明cole凝胶干预也可以显著降低金黄地鼠皮脂腺斑中皮脂含量，控制油脂的分泌，如图11所示。

结论：50％乙醇油茶叶提取物具有良好的抗氧化性，可以缩小金黄地鼠皮脂腺斑面积，减少皮脂腺数量，可以降低金黄地鼠皮脂腺斑组织中皮脂含量，控制油脂的分泌。可以应用于控油、有抑制皮脂分泌需求(或功能)的化妆品、洗护用品以及医疗保健等领域，市场前景广阔。

对比实验、

将实施例1中的油茶叶改成油茶蒲，参照实施例1所述方法，从而获得相应的油茶蒲提取物(50％乙醇油茶蒲提取物)。将油茶蒲提取物替代实施例2中的50％乙醇油茶叶提取物，从而获得相应的油茶蒲凝胶。

将油茶叶提取物和油茶蒲提取物按照常规的亚硝酸钠-硝酸铝比色法，folin-ciocalteu法，分别测定两种提取物的黄酮、多酚含量，所得结果如下表3：

表3

将上述油茶蒲提取物(fh)替代油茶叶提取物，按照上述实验方法进行抑制皮脂分泌的实验，将灌胃2700mg/kg·d油茶蒲50％乙醇提取物实验组命名为为g-hfh，将外涂18％油茶蒲50％乙醇提取物实验组命名为a-fh。

结果1、灌胃2700mg/kg·d油茶蒲50％乙醇提取物(g-hfh)对金黄地鼠左右皮脂腺斑面积的影响：

与空白对照g-con比，阳性对照g-tan的左侧皮脂腺斑面积，到第四周显著缩小(p＜0.05)，右侧皮脂腺斑面积从第三周开始出现显著缩小(p＜0.05)。油茶蒲提取物组g-hfh与空白对照g-con比，金黄地鼠两侧皮脂腺斑面积从第三周开始呈缩小的趋势直至4周实验结束，结果无显著差异(p＞0.05)。如图12所示。

结果2、外涂18％油茶蒲50％乙醇提取物(a-fh)对金黄地鼠左右皮脂腺斑面积的影响

外涂18％油茶蒲50％乙醇提取物(a-fh)实验，与空白组a-con比，阳性对照a-kcyt组金黄地鼠左、右两侧皮脂腺斑面积分别从第二周和第三周开始呈显著缩小(p＜0.05)。与空白组a-con比，外涂18％油茶蒲50％乙醇提取物a-fh组金黄地鼠左、右两侧皮脂腺斑面积分别从第二周和第一周开始呈缩小的趋势直至四周实验结果，但结果无显著差异(p＞0.05)，如图13所示。

无论是灌胃还是外涂的给药方式进行的实验结果表明油茶蒲50％乙醇提取物对金黄地鼠皮脂腺斑略有缩小的趋势，但结果无显著差异(p＞0.05)。

结果3、灌胃2700mg/kg·d油茶蒲50％乙醇提取物(g-hfh)对金黄地鼠皮脂腺斑组织中甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸的含量影响；如表4。

表4、金黄地鼠皮脂腺斑组织中甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸的含量(灌胃)

注：*p<0.05，***p<0.001表示g-hfh、g-tan与g-con比较

表4的结果表明：阳性对照组g-tan可以极显著降低金黄地鼠皮脂腺斑组织中tg含量(p＜0.001)和nefa含量(p＜0.001)，油茶蒲提取物g-hfh也能显著降低tg和nefa含量(p＜0.05，p＜0.05)，但效果远不及g-tan。g-hfh对皮脂腺斑中tc含量影响不显著(p＞0.05)。

结果4、外涂油茶蒲50％乙醇提取物凝胶对金黄地鼠皮脂腺斑组织中甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸的含量影响；如表5。

表5、金黄地鼠皮脂腺斑组织中甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸的含量(外涂)

注：**p<0.01表示a-fh、a-kcyt与a-con比较

表5的结果表明阳性对照组a-kcyt可以显著降低金黄地鼠皮脂腺斑组织中tg含量(p＜0.01)和nefa含量(p＜0.01)，油茶蒲提取物a-fh表现出降低皮脂腺斑组织中tg和nefa含量的趋势，但结果无显著差异(p＞0.05)。a-fh对皮脂腺斑组织中tc含量影响不显著(p＞0.05)。该实验的结果说明外涂油茶蒲提取物a-fh有抑制皮脂腺的脂质分泌的趋势，但结果不显著，与结果2的结论一致。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。