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一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成分的方法与流程

泰然健康网
2024-12-28 14:15

[0001]
本发明属于保健品质量检测领域，具体涉及一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成份的方法。

背景技术：

[0002]
左旋肉碱(l-carnitine)，又称l-肉碱或音译卡尼丁，化学名称β-羟基-γ-三甲铵丁酸，化学式为c7h
15
no3，是一种帮助人体脂肪代谢的类氨基酸类物质。足量的左旋肉碱配合有氧运动可以显著提高脂肪代谢的效率，解决脂肪代谢困难带来的一系列健康问题，如脂肪肝，高血脂，高血压等，因此，很多保健食品中都会添加左旋肉碱。此外由于左旋肉碱具有比较高的安全性，目前国家已经允许在婴幼儿奶粉中添加左旋肉碱，用于防止婴幼儿体重超重。因为左旋肉碱自身荣易吸潮，所以一般将左旋肉碱制成其有机酸盐，目前市面上左旋肉碱类制剂主要有两类，分别为左旋肉碱富马酸盐及左旋肉碱酒石酸盐，其中左旋肉碱富马酸盐主要存在于一些进口左旋肉碱类保健品中(美国的gnc，普丽普莱等)，左旋肉碱酒石酸盐主要存在于国产左旋肉碱保健品(修正药业，汤臣倍健等企业生产的左旋肉碱茶多酚片)中。
[0003][0004]
左旋肉碱类保健品中有效含量是衡量其质量的重要指标，准确测定保健食品中左旋肉碱含量具有重要意义。目前测定左旋肉碱主要通过高效液相色谱法，紫外分光光度法，离子色谱法，高效液相色谱-质联用法，酶反应试剂盒法等。国家标准中对左旋肉碱的测定方法为分光光度法，该方法存在样品回收困难，操作繁琐、耗费时间长、检测灵敏度不高等问题。而定量核磁共振(qnmr)通过峰面积和待测原子核数量之间严格的对应关系实现定量，具有无需高纯对照品，不破坏样品，操作较为简单，人为操作误差小，测试结果准确可靠等优势，因此，美国药典，英国药典及欧洲药典均将定量核磁法收录其中作为有效测定方法。2010年中国药典就将核磁共振定量法作为定量及定性测试方法收录其中，2020新版中国药典继续将定量核磁共振波谱法作为有效测定方法收录其中。本文以左旋肉碱富马酸盐
为例，采用吡嗪为内标，重水为溶剂，通过定量1h nmr测定市售进口左旋肉碱富马酸盐保健品中有效成分含量，该方法准确可靠，简便易行，可用于测定左旋肉碱保健品中有效成份含量。

技术实现要素：

[0005]
解决的技术问题：针对上述现有的分析测试方法存在样品回收困难，操作繁琐、耗费时间长、需要待测组分高纯对照品等技术问题，为了解决这个问题，本发明开发了一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成份的方法。
[0006]
技术方案：
[0007]
一种通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱类保健品中有效成分的方法，步骤为：
[0008]
第一步，氘代试剂的选择：称取20mg左旋肉碱类化合物，选择d2o作为氘代溶剂，选用topspin2.1软件自带proton标准参数分别测定1h nmr谱，活泼氢均被氘代；
[0009]
第二步，定量峰及内标物的选择：采用topspin 2.1软件默认参数直接测定左旋肉碱的1h nmr谱，用d2o残余溶剂峰标定化学位移，选择吡嗪为内标，其定量峰为δ8.57(4h，s)；
[0010]
第三步，测试参数优化：选择zg30脉冲采样，设定采样时间(aq)为4.15s，弛豫时间d1为30s，采样次数ns为32，空采次数ds为0，谱宽sw为13.00，中心频率o1p为6.1，其他参数默认；
[0011]
第四步，样品测试及数据处理：采用第三步优化后的测试参数测定样品的1h nmr谱；以吡嗪δ8.57(4h，s)处单峰为基准，准确积分δ3.19(9h，s)处峰面积，为减少误差，选取定量峰或内标峰的峰型轮廓线与水平基线交叉处之间作为积分区域，且内标峰与定量峰均积分5次，取其平均值作为实际积分面积。
[0012]
第五步：方法学验证包括线性关系验证、精密度实验、重复性实验及稳定性实验。
[0013]
进一步的，所述按照样品及内标物及氘代试剂取用量，依据下式计算所取样品中左旋肉碱富马酸盐质量：
[0014][0015]
上式中，m
左旋肉碱
，m
吡嗪
分别表示左旋肉碱盐和吡嗪的质量，m
左旋肉碱
表示左旋肉碱分子量，s
左旋肉碱
、s
吡嗪
分别表示左旋肉碱和吡嗪定量峰峰面积。
[0016]
进一步的，采购两款进口左旋肉碱富马酸盐类保健品，各取一片药片，称取质量，以研钵研成粉末，准确称取20-30mg样品，以1000μl标准溶液溶解，超声10min使有效成份充分溶解，静置3h使上层澄清，准确移取600μl上层清液转加入核磁管中，采用优化好的测试参数测定其1h nmr谱，根据峰面积通过权利要求2中公式计算溶液中左旋肉碱有效成份含量。
[0017]
进一步的，所述第五步中线性关系验证测试：样品制备：准确称取280.2mg吡嗪样品，以重水溶解后转移至10ml容量瓶中，以重水定容至刻度线，摇匀备用，作为标准溶液；称取35.9mg左旋肉碱富马酸盐，装入一次性pe管中，加入1.5ml标准溶液，超声20min使样品完全溶解，得到均一、澄清、透明溶液，依次取100μl，150μl，200μl，250μl，300μl，450μl加入
1.5ml一次性pe管中，以标准溶液稀释至600μl，超声10min使其完全溶解，转移至1-6号核磁管中，得到1-6号待测溶液，按照第四步方法测试并处理数据；以左旋肉碱定量峰峰面积与吡嗪定量峰面积比值为纵坐标，样品中左旋肉碱富马酸盐实际质量为横坐标作图，得工作曲线，对工作曲线进行线性拟合得回归方程，表明样品质量与峰面积之间具有良好的线性关系。
[0018]
进一步的，所述重复性测试：样品制备：称取左旋肉碱盐40-50mg，吡嗪270-400mg，以重水溶解后转移至10ml容量瓶中，用重水定容至刻度线，摇匀，取6份0.6ml样品加入1`-6`号核磁管中，得到1`-6`号待测液；按照第四步方法测试并处理数据；根据左旋肉碱富马酸盐定量峰面积与吡嗪定量峰面积比值计算rsd小于1％，表明该方法具有良好的可重复性。
[0019]
进一步的，所述精密度测试：取线性测试的1号样品，按照第四步方法测试并处理数据，平行测试5次，通过左旋肉碱富马酸盐定量峰与内标定量峰面积比值计算标准偏差，计算所得rsd小于0.5％，说明样品及内标物在室温溶液状态下具有良好的精密度。
[0020]
有益效果：
[0021]
1、本发明专利建立了一种高效，准确，方便的通过核磁共振氢谱定量分析左旋肉碱类保健品中有效成份的方法。
[0022]
2、本发明建立的方法具有较好的普适性，可以用于左旋肉碱类保健品中左旋肉碱酒石酸盐，左旋肉碱富马酸盐，左旋肉碱原型化合物等有效成份的定量分析。
[0023]
3、本发明建立方法具有和高效液相色谱(hplc)法相近的测试准确度，与hplc法相比，无需待测组分的高纯对照品，无需酸化，萃取，过滤等繁复的样品前处理过程，大大节约测试成本。
[0024]
4、本发明方法具有较低的检测限和定量限(小于10μg/ml级别)，
附图说明：
[0025]
图1为本申请左旋肉碱富马酸盐和吡嗪混合物核磁共振氢谱图。
[0026]
图2为本申请左旋肉碱酒石酸盐和吡嗪混合物核磁共振氢谱图。
[0027]
图3为本申请左旋肉碱富马酸盐质量和峰面积线性关系图。
[0028]
图4为本申请左旋肉碱酒石酸盐质量和峰面积线性关系图。
具体实施方式
[0029]
以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。
[0030]
在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。在下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
[0031]
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
[0032]
根据下述实施例和比较例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例和比较例所描述内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
[0033]
实施例1
[0034]
通过核磁共振氢谱通过核磁共振氢谱定量测定左旋肉碱富马酸盐类保健品中有
效成份，具体步骤如下：
[0035]
第一步，氘代试剂的选择：左旋肉碱富马酸盐属于有机盐类，可溶于大极性溶剂如甲醇、水，称取20mg左旋肉碱类化合物如左旋肉碱富马酸盐，以600μl氘代试剂(d2o，cd3od，dmso-d6)溶解，选用topspin2.1软件自带proton标准参数分别测定1h nmr谱，经过分析可知：采用d2o做溶剂时，所有活泼氢均被氘代，峰型较为尖锐，适合用于定量试验；样品在cd3od中溶解度不佳，氘代试剂溶剂残余峰很强，影响定量分析准确度，选用dmso-d6作溶剂时，图谱质量较高，但是活泼氢残余峰很宽，与常见内标物定量峰存在简并，无法进行定量分析，且dmso-d6价格昂贵，将大幅增加测试成本，综合考虑，选择d2o作为氘代溶剂最合适；
[0036]
第二步，定量峰及内标物的选择：采用topspin 2.1软件默认参数直接测定左旋肉碱的1h nmr谱，用d2o残余溶剂峰标定化学位移，一般要求内标峰为尖锐单峰，且不能和别的峰重合。综合分析选择n(ch3)对应峰δ3.21(9h，s)为定量峰，适合重水的常见内标物有马来酸和吡嗪，但是马来酸的定量峰和待测物中富马酸烯氢峰重叠，不适合做此实验的内标。综合考虑选择吡嗪为内标，其定量峰为δ8.57(4h，s)；
[0037]
第三步，测试参数优化：考虑到zg30脉冲采样可以大幅缩短弛豫等待时间，具有更好的累加速度，单位时间内信噪比更好，从时间经济性角度选择zg30脉冲采样；采样时间(aq)图谱质量及定量效果有重要影响：采样时间过短，即信号还未完全衰减就停止采样，会导致信号被截尾，可能会得到虚假信息，由于核磁共振有效信号主要集中在fid曲线前端，后面主要以噪音为主，所以过度增加采样时间反而降低信噪比且增加测试时间，于定量核磁实验不利，通过观察采样时间为4.15s所得fid曲线，发现信号正好衰减完毕且有少量富余，所以设定采样时间(aq)为4.15s。对于定量核磁实验，弛豫等待时间d1和采样次数ns是最重要的两个参数，ns决定核磁共振谱图的信噪比，足够的采样次数可以使图谱具有足够的信噪比，从而获取更准确的定量结果；足够的d1时间可以让所有对应的原子核有足够时间回到基态，避免由于弛豫饱和导致原子核数和峰面积不成比例。本实验采用先固定采样次数，延长d1考察d1对定量峰峰面积的影响，结果表明当d1延长到30s后再增加d1，峰面积已经变化不大，所以选择d1为30s，而后固定d1，增加采样次数ns，结果表明增加ns至32次之后，再增加采样次数对实验结果影响可以忽略不计。综合考虑，修改后采样参数为：zg30脉冲，采样时间(aq)为4.15s，弛豫时间d1为30s，采样次数ns为32，空采次数ds为0，谱宽sw为13.00，中心频率o1p为6.1，其他参数默认；
[0038]
第四步测试及数据处理：采用第三步修改后的测试条件测定所有样品的1h nmr谱。以吡嗪δ8.57(4h，s)处单峰为基准(峰面积定为1，不包括卫星峰)，准确积分δ3.19(9h，s)处峰面积(不包含卫星峰)，为减少误差，选取定量峰或内标峰的峰型轮廓线与水平基线交叉处之间作为积分区域，且内标峰与定量峰均积分5次，取其平均值作为实际积分面积；
[0039]
第五步：方法学验证：
[0040]
线性测试：样品制备：准确称取280.2mg吡嗪样品，以重水溶解后转移至10ml容量瓶中，以重水定容至刻度线，摇匀备用，作为标准溶液。称取35.9mg左旋肉碱富马酸盐，装入一次性pe管中，加入1.5ml标准溶液，超声20min使样品完全溶解，得到均一、澄清、透明溶液，依次取100μl，150μl，200μl，250μl，300μl，450μl加入1.5ml一次性pe管中，以标准溶液稀释至600μl，超声10min使其完全溶解，转移至1-6号核磁管中，得到1-6号待测溶液，按照第四步方法测试并处理数据。以左旋肉碱定量峰峰面积与吡嗪定量峰面积比值为纵坐标，
样品中左旋肉碱富马酸盐实际质量为横坐标作图，得工作曲线(fig.3)，对工作曲线进行线性拟合得回归方程y＝0.03944x-0.00131(r＝0.99986，n＝6)，表明当内标物质量为16.81mg，左旋肉碱富马酸盐质量在2.39mg-10.77mg之间，样品质量与峰面积之间具有良好的线性关系
[0041]
重复性测试：样品制备：称取左旋肉碱富马酸盐46.4mg，吡嗪280.2mg，以重水溶解后转移至10ml容量瓶中，用重水定容至刻度线，摇匀，取6份0.6ml样品加入1`-6`号核磁管中，得到1`-6`号待测液；按照第四步方法测试并处理数据。根据左旋肉碱富马酸盐定量峰面积与吡嗪定量峰面积比值(0.1084，0.1085，0.1084，0.1085，0.1087，0.1081)计算rsd为0.197％。表明该方法具有良好的可重复性
[0042]
精密度测试：取线性测试的1号样品，按照第四步方法测试并处理数据，平行测试5次，通过左旋肉碱富马酸盐定量峰与内标定量峰面积比值计算标准偏差，计算所得rsd＝0.173％(峰面积比值为：0.0920，0.0921，0.0920，0.0920，0.0924)，说明样品及内标物在室温溶液状态下具有良好的精密度。
[0043]
溶液中左旋肉碱富马酸盐质量计算方法：
[0044]
可以依据下式计算待测溶液中左旋肉碱富马酸盐：
[0045][0046]
上式中，m
左旋肉碱
，m
吡嗪
分别表示左旋肉碱和吡嗪的质量，s
左旋肉碱
、s
吡嗪
分别表示左旋肉碱和吡嗪定量峰峰面积。
[0047]
第七步，应用：采购两款进口左旋肉碱富马酸盐类保健品，各取一片药片，称取质量，以研钵研成粉末，准确称取一定质量样品，以1000μl标准溶液溶解，超声10min使有效成份充分溶解，静置3hr使上层澄清，准确移取600μl上层清液转加入核磁管中，按照第四步方法测试并处理数据，根据峰面积采用第六步公式计算溶液中左旋肉碱富马酸盐含量。
[0048]
表1两种市售保健品左旋肉碱实际含量
[0049][0050][0051]
经检测，两种进口左旋肉碱富马酸盐类保健品(gnc，普丽普莱)有效成分含量均超过标称值，特别是gnc的产品，标称每片含左旋肉碱富马酸盐500mg，而我们实测值为917.01mg，与标称值偏差很大。有趣的是，如果我们将测得的左旋肉碱富马酸盐折合为左旋肉碱有效成分质量，则每片含左旋肉碱536.45mg，则与其标称值较为接近，所以我们推测可能是产品说明标示有误，因为在其产品瓶身生清晰的标注：每片含自由形态左旋肉碱富马酸盐500mg。此外需要注意的是，虽然左旋肉碱是一种安全性较高的膳食补充剂，但是摄取过量会产生一些不良反应，目前认为其安全范围在1000mg/d-5000mg/d。各国对左旋肉碱食用量都有相关规定：如美国fda规定左旋肉碱的每日限量为20mg/kg；欧盟规定左旋肉碱的每日限量为1-2g。我国食品添加剂卫生标准中规定饮料的l-肉碱最大使用量为3g/l。为确
保产品的食用安全性，在保健食品的审评中，左旋肉碱的用量主要参考欧盟的规定，成人左旋肉碱的每日食用量不应超过2g。gnc的产品瓶身标称值与其实际含量不一致，不好控制每日服用剂量，可能会因为服用过量而产生一些不良反应。相对而言，普丽普莱的产品标称有效成分含量较为接近实际值，可以更方便控制每日服用量。
[0052]
实施例2
[0053]
通过核磁共振氢谱定量测定保健品中左旋肉碱酒石酸盐含量，具体步骤如下：
[0054]
第一步，氘代试剂的选择：左旋肉碱酒石酸盐属于有机盐类，可溶于甲醇、水等大极性溶剂，称取30mg左旋肉碱酒石酸盐，以600μl氘代试剂(d2o，cd3od，dmso-d6)溶解，选用topspin2.1软件自带proton标准参数分别测定1h nmr谱，经过分析可知：采用d2o做溶剂时，所有活泼氢均被氘代，峰型较为尖锐，适合用于定量试验；
[0055]
第二步，定量峰及内标物的选择：采用topspin 2.1软件默认参数直接测定左旋肉碱酒石酸盐的1h nmr谱，用d2o残余溶剂峰标定化学位移。一般要求内标峰为尖锐单峰，且不能和别的峰重合。综合分析选择n(ch3)对应峰δ3.21(9h，s)为定量峰，适合重水的常见内标物有马来酸和吡嗪，适合重水的常见内标物有马来酸和吡嗪，两者均符合内标物要求，考虑到重水-吡嗪体系在保健品中左旋肉碱定量测定中适用范围更广，可用于保健品中多种形式左旋肉碱(左旋肉碱，左旋肉碱富马酸盐及左旋肉碱酒石酸盐)含量的测定，所以选择吡嗪作内标，其定量峰为δ8.59(4h，s)，其定量1h nmr测定结果如图3所示。
[0056]
第三步，测试参数优化：考虑到zg30脉冲采样可以大幅缩短弛豫等待时间，具有更好的累加速度，单位时间内信噪比更好，从时间经济性角度选择zg30脉冲采样；采样时间(aq)图谱质量及定量效果有重要影响：采样时间过短，即信号还未完全衰减就停止采样，会导致信号被截尾，可能会得到虚假信息，由于核磁共振有效信号主要集中在fid曲线前端，后面主要以噪音为主，所以过度增加采样时间反而降低信噪比且增加测试时间，于定量核磁实验不利，通过观察采样时间为5.15s所得fid曲线，发现信号正好衰减完毕且有少量富余，所以设定采样时间(aq)为5.15s。对于定量核磁实验，弛豫等待时间d1和采样次数ns是最重要的两个参数，ns决定核磁共振谱图的信噪比，足够的采样次数可以使图谱具有足够的信噪比，从而获取更准确的定量结果；足够的d1时间可以让所有对应的原子核有足够时间回到基态，避免由于弛豫饱和导致原子核数和峰面积不成比例。本实验采用先固定采样次数，延长d1来考察d1对定量峰峰面积的影响，结果表明当d1延长到25s后再增加d1，峰面积已经变化不大，所以选择d1为25s，而后固定d1，增加采样次数ns，结果表明增加ns至32次之后，再增加采样次数对实验结果影响可以忽略不计。综合考虑，修改后采样参数为：zg30脉冲，采样时间(aq)为5.15s，弛豫时间d1为25s，采样次数ns为32，空采次数ds为0，谱宽sw为13.01，中心频率o1p为5.88，其他参数默认；
[0057]
第四步样品测试及数据处理：依次采用第三步修改后好的测试条件测定各号样品的1h nmr谱。以吡嗪δ8.59(4h，s)处单峰为基准(峰面积定为1，不包括卫星峰)，准确积分δ3.22(9h，s)处峰面积(不包含卫星峰)，为减少误差，选取定量峰或内标峰的峰型轮廓线与水平基线交叉处之间作为积分区域，且内标峰与定量峰均积分5次，取平均值作为实际积分面积。
[0058]
第五步方法学验证：
[0059]
线性验证：准确称取311.4mg吡嗪样品，以重水溶解后转移至10ml容量瓶中，以重
水定容至刻度线，摇匀备用，作为标准溶液。称取42.3mg左旋肉碱酒石酸盐，装入一次性pe管中，加入1.5ml标准溶液，超声20min使样品完全溶解，得到均一、澄清、透明溶液，依次取100μl，150μl，200μl，250μl，300μl，450μl加入1.5ml一次性pe管中，以标准溶液稀释至600μl，超声10min使其完全溶解，转移至1-6号核磁管中，得到1-6号待测溶液。按照第四步完成测试及数据处理。以左旋肉碱酒石酸盐定量峰峰面积与吡嗪定量峰面积比值(表1)为纵坐标，样品中左旋肉碱酒石酸盐实际质量为横坐标作图，得工作曲线(附图3)，对工作曲线进行线性拟合得回归方程y＝0.04188x-0.00608(r＝0.99992,n＝6)，表明当内标物质量为18.68mg，左旋肉碱酒石酸盐质量在2.82mg-12.69mg之间，样品质量与峰面积之间具有良好的线性关系
[0060]
重复性测试：称取左旋肉碱酒石酸盐52.9mg，吡嗪311.5mg重水溶解后转移至10ml容量瓶中，用氘代水定容至刻度线，摇匀，取6份0.6ml样品加入1`-6`号核磁管中，得到1`-6`号待测液。按照第四步完成测试及数据处理。根据左旋肉碱酒石酸盐定量峰面积与吡嗪定量峰面积比值(0.1419，0.1424，0.1415，0.1425，0.1428，0.1418)计算rsd为0.0505％。
[0061]
表明该方法具有良好的可重复性；
[0062]
精密度测试：取2号样品，采用优化好的测试参数，平行测试5次，通过左旋肉碱酒石酸盐定量峰与内标定量峰面积比值计算标准偏差，计算所得rsd＝0.0294％(峰面积比值为：0.1699，0.1701，0.1697，0.1698，0.1705，0.1698)，说明样品及内标物在室温溶液状态下具有良好的精密度。
[0063]
第六步溶液中左旋肉碱富马酸盐质量计算方法
[0064]
可以依据下式计算待测溶液中左旋肉碱质量：
[0065][0066]
上式中，m
左旋肉碱
，m
吡嗪
分别表示左旋肉碱和吡嗪的质量，s
左旋肉碱
、s
吡嗪
分别表示左旋肉碱酒石酸盐和吡嗪定量峰峰面积。
[0067]
第七步，应用：阅读两种左旋肉碱产品说明书知，汤臣倍健的左旋肉碱茶多酚片每100g含有效成分左旋肉碱酒石酸盐22g，修正药业的产品则每100g含有效成份15g。各取一片药片，用研钵将药片仔细研碎，根据标称有效成分含量计算后分别称取20-30mg粉末，加入一次性pe管中，加入1.0ml标准溶液，40℃下超声10min，静置过夜，取上层清液0.6ml，加入核磁管中，按照第四步完成测试及数据处理，根据第六步公式计算核每份样品中左旋肉碱酒石酸盐质量，逆推出原药片中左旋肉碱含量，结果如表3所示，两种左旋肉碱酒石酸盐保健品中有效成分含量均超过了其标称值。
[0068]
表3两种市售左旋肉碱茶多酚类保健品中左旋肉碱实际含量
[0069][0070]
经过检测，两种左旋肉碱茶多酚类保健品(汤臣倍健，修正药业)有效成份(左旋肉碱酒石酸盐)含量均超过标称值，且和标称值较为接近，不同的是修正药业的左旋肉碱茶多
酚片中水溶性成份更复杂，图谱相对复杂，但是不影响定量测定，而汤臣倍健的产品水溶液中成份较为简单，也更便于分析。实验表明，使用该方法分析国产左旋肉碱茶多酚类保健品中有效成份含量时其中的茶多酚对定量测定无影响。此外，国产左旋肉碱保健品中有效成分标注较为规范：标注有效成份含量和实测值较为接近，且标注名称较为规范。
[0071]
比较例：
[0072]
现有测定保健品中左旋肉碱的方法很多，其中高效液相色谱法是最为简单实用的方法，故将本发明专利申请方法高效液相色谱(hplc)法[莫紫梅，韦春梦.高效液相包谱法测定保健食品中左旋肉碱含量.食品安全质量检测学报(j),2016,7(5),2093-2096]进行比较：采用核磁共振氢谱法和高效液相色谱法分别测定了实施例中两种左旋肉碱保健品中有效成份含量，并对两种测试方法的结果进行比较，如表4所示：本方法测定结果与高效液相色谱法相比无明显偏差。
[0073]
表4高效液相色谱法测定两种市售左旋肉碱保健品有效成份实际含量
[0074][0075]
与高效液相色谱法相比，定量核磁共振法具有相似的准确度，而且定量核磁共振法采用峰面积和原子核数目之间的对应关系实现定量，无需待测组份的高纯对照品，可显著节约测试成本。此外，本发明方法只需将待测样品碾碎，以氘代水萃取、静置后直接取上层清液进行测试，无需酸化，萃取，过滤等繁杂的样品前处理过程，可以大大简化测试流程，此外，本发明方法不破坏样品，样品回收方便。