01tRNA的基本功能与作用
转运RNA(tRNA)在生物体内扮演着至关重要的角色。作为一类非编码RNA,它的数量在RNA总量中占据约16%,仅次于rRNA,是体内RNA的主要成分之一。tRNA在体内运输氨基酸,参与蛋白质的合成,这是其经典且主要的生物学功能。同时,tRNA还参与细胞内的多种其他功能活动,发挥着更为广泛的作用。

02tRNA的结构特点
❒ 富含稀有碱基
稀有碱基,即除A、G、C和U之外的特殊碱基,如双氢尿嘧啶(DHU)、假尿嘧啶核苷(Ψ)以及甲基化的嘌呤(m7G、m7A)等。这些碱基通过转录后修饰形成,tRNA中含有10~20%的稀有碱基。与常规的嘧啶核苷不同,后者是杂环的N-1原子与戊糖的C-1'原子相连,而假尿嘧啶核苷则是通过杂环的C-5原子与戊糖的C-1'原子形成连接。在tRNA中,这些稀有碱基的比例大约占据总碱基的10~20%。

❒ tRNA的空间结构
tRNA分子中存在某些特定的核苷酸序列,它们能够遵循碱基互补配对的原则,从而构建出局部的链内双螺旋结构。在这些双螺旋结构之间,那些无法形成互补碱基对的核苷酸序列则向外突出,形成了环状或襻状的结构。这种结构被称作茎环结构或发夹结构。tRNA的二级结构具有茎环结构,呈现出类似三叶草的形态。由于茎环结构的存在,tRNA的二级结构呈现出类似三叶草的形态。其中,两侧的发夹结构分别含有稀有碱基,被称为DHU环和TΨC环。上方的茎被称为氨基酸臂,而下方的发夹结构则被称为反密码子环。值得注意的是,在反密码子环与TΨC环之间还存在一个可变臂,其长度在不同tRNA之间有所差异,可能包含几个到十几个核苷酸。除了可变臂和DHU环外,tRNA其他部分的核苷酸数目和碱基对都表现出高度保守性。通过X射线晶体衍射图的分析揭示,所有tRNA都展现出相似的倒“L”形空间结构。这种结构的稳定性主要归功于碱基间产生的特殊氢键和碱基堆积力。


❒ 3'端与氨基酸结合
所有RNA的3'端均以“CCA”三个核苷酸作为结束,而氨酰-tRNA合成酶则负责将氨基酸通过酯键与腺嘌呤A的C-3'原子相连结,从而形成氨酰-tRNA。tRNA通过酶的作用,将氨基酸以酯键连接到3'端的腺嘌呤上,赋予tRNA作为氨基酸载体的功能。唯有与tRNA相连的氨基酸方可参与蛋白质的生物合成过程。tRNA所携带的氨基酸种类,是由其反密码子(anticodon)所决定,该反密码子环由7至9个核苷酸组成,并通过碱基互补配对的方式识别mRNA上的密码子。这种密码子与反密码子的结合机制,确保了tRNA能准确无误地转运相应的氨基酸,参与蛋白质多肽链的合成。由于mRNA上的密码子存在简并性,即多个密码子可以编码同一个氨基酸,因此某些氨基酸可能由一种tRNA作为载体,而其他氨基酸则可能有多种tRNA作为转运载体,以适应这种简并性的需求。

03tRNA如何与氨基酸结合
❒ 氨酰-tRNA合成酶的作用
tRNA在3’末端含有CCA三个核苷酸,这使得它能够结合氨基酸。氨酰-tRNA合成酶确保氨基酸与tRNA精确结合。值得注意的是,每种tRNA仅限于结合一种特定的氨基酸,尽管一种氨基酸可能被1-6种不同的tRNA转运。氨酰-tRNA合成酶在其中扮演了至关重要的角色。这种酶决定了氨基酸与tRNA连接的准确性,而且它对氨基酸和tRNA都表现出高度特异性。在所有氨基酸中,Lys对应两种酶,而其他氨基酸则通常只对应一种酶。此外,磷酸化丝氨酸和吡咯赖氨酸也各有其特定的酶。
氨酰-tRNA合成酶在氨基酸与tRNA的结合过程中发挥着关键作用。它能够识别并催化特定的氨基酸与相应的tRNA结合,生成氨基酰-tRNA。这一过程需要ATP提供能量,使氨基酸在羧基上进行活化,形成氨基酰-AMP。随后,该中间产物与氨基酰-tRNA合成酶结合,形成三联复合物。最后,该复合物再与特定的tRNA相互作用,将氨基酰准确地转移到tRNA的氨基酸臂上。
整个过程可以概括为两步:激活和转移。
在第一步激活中,氨酰-tRNA合成酶首先识别其催化的特定氨基酸和另一关键底物ATP。在酶的催化作用下,氨基酸的羧基与AMP上的磷酸基团发生反应,形成酯键,进而生成氨基酰-AMP。这一步同时伴随着PPi的释放。在此阶段,生成的氨基酰-AMP仍然与酶分子紧密结合。
紧接着进入第二步转移。在这一步中,氨酰-tRNA合成酶继续发挥其催化作用,促使氨基酰-AMP与特定的tRNA通过酯键相结合。这一反应将氨基酸准确地连接至tRNA 3'端的核糖上,从而完成了整个氨基酸与tRNA的结合过程。
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