高纯度低聚半乳糖的制备方法与流程
技术特征：
1.高纯度低聚半乳糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)、利用乙酸-乙酸钠缓冲液配制乳糖溶液，利用乙酸-乙酸钠缓冲液配制β-半乳糖苷酶的酶液；
向乳糖溶液中加入酶液，于50±2℃反应4±0.5小时，得低聚半乳糖混合液；
β-半乳糖苷酶与乳糖的用量比为40±5u/g乳糖；
2)、采用硅胶层析：
将低聚半乳糖混合液过硅胶层析柱，洗脱剂为正丁醇：乙醇：乙酸：水＝3：1：1：1的体积比混合而得；流速为0.4±0.05ml/min；
收集含目标产物的洗脱液；
3)、将步骤2)所得的洗脱液干燥，得高纯度低聚半乳糖。
2.根据权利要求1所述的高纯度低聚半乳糖的制备方法，其特征在于：
所述目标产物为低聚半乳三糖、低聚半乳四糖以及≥低聚半乳五糖。
3.根据权利要求1或2所述的高纯度低聚半乳糖的制备方法，其特征在于：
步骤2)的硅胶为200-300目的硅胶。
4.根据权利要求3所述的高纯度低聚半乳糖的制备方法，其特征在于：
所述步骤3)的干燥为：先于60±5℃干燥，再用双蒸水重溶，最后冻干。
5.根据权利要求4所述的高纯度低聚半乳糖的制备方法，其特征在于：
所述步骤2)中，通过薄层析法监测所收集的洗脱液中的低聚半乳糖，将只含有低聚半乳糖的洗脱液进行混合。
6.根据权利要求1～5任一所述的高纯度低聚半乳糖的制备方法，其特征在于：
选用ph＝5的乙酸-乙酸钠缓冲液。
7.根据权利要求1～5任一所述的高纯度低聚半乳糖的制备方法，其特征在于：
所述步骤2)中采用湿法填装柱。
技术总结
本发明公开了一种高纯度低聚半乳糖的制备方法，包括以下步骤：利用乙酸‑乙酸钠缓冲液配制乳糖溶液，利用乙酸‑乙酸钠缓冲液配制β‑半乳糖苷酶的酶液；向乳糖溶液中加入酶液反应；将所得的低聚半乳糖混合液过硅胶层析柱，洗脱剂为正丁醇：乙醇：乙酸：水＝3：1：1：1的体积比混合而得；收集含目标产物的洗脱液；干燥，得高纯度低聚半乳糖。本发明首次将硅胶运用到低聚半乳糖的分离纯化中，极大简化了低聚半乳糖纯化的工艺以及降低其生产成本；从而推动低聚半乳糖的市场化。
技术研发人员：王敏奇;王庚;汪海东
受保护的技术使用者：浙江大学
技术研发日：2020.12.07
技术公布日：2021.03.12
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