一种用于液基细胞制片的样本密度分离液的制作方法
本发明涉及生物医学技术中液基细胞学样本前置处理领域，具体涉及一种用于液基细胞制片的样本密度分离液。
背景技术：
宫颈癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，是妇女健康的主要杀手，其发病率仅次于乳腺癌，据数据统计，全球每年新发的宫颈癌病例大约在50万左右，其中80％发生在发展中国家，因此对宫颈癌早期筛查就尤为重要。
目前常用的宫颈癌早期筛查方法为液基细胞学检查法，它是采用液基薄层细胞检测系统检测宫颈细胞并进行细胞学分类诊断，它是目前国际上较先进的一种宫颈癌细胞学检查技术，与传统的宫颈刮片巴氏涂片检查相比明显提高了标本的满意度及宫颈异常细胞检出率。宫颈防癌细胞学检查对宫颈癌细胞的检出率为100％，同时能发现局部癌前病变，微生物感染如霉菌、滴虫、病毒、衣原体等。
传统的液基细胞学制片技术包括有膜式过滤法薄层制片技术(tct)、自动离心沉降法制片技术(lct)、离心甩片法制片技术以及利普手工离心涂片技术(lpt)，其中自动离心沉降法制片技术是将收集到的样品先全部保存在保存液后，再加入密度大的样本密度分离液，利用密度梯度分离原理，使保存液与样本密度分离液分为上下两层，这样样品中细胞沉降达到两者交界处，只有病变的细胞(其核浆比变大导致比重变大)和自身比重较大的细胞如肿瘤细胞、上皮细胞及部分其他细胞能克服下层分离液阻力的而继续下降，再被用来收集制片。
而传统常用的样本密度分离液为ficoll分离液，ficoll分离液其主要成分是一种合成的蔗糖聚合物，简称聚蔗糖，但在向保存液中加入ficoll分离液后，在保存液与样本密度分离液分层处的未被保存液完全裂解的红细胞会与聚蔗糖接触而凝集成串钱状而沉积于管底与下沉的具有诊断学意义的细胞(上皮细胞、肿瘤细胞)混合，影响后续制片后对样品的观察。
技术实现要素：
针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种用于液基细胞制片的样本密度分离液，使其在加入到细胞保存液后，能使有诊断意义的细胞更快自然沉降的同时减少红细胞及炎症细胞沉降干扰。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种用于液基细胞制片的样本密度分离液，以质量百分比计，所述样本密度分离液包含以下组分：甘油6%~11%；无水乙醇2%~4%；氯化钠3%~5%；蒸馏水79.6%~89.3%；茶皂素0.4%~0.7%。
采用上述方案，甘油是一种无色味甜澄明黏稠液体，在冻藏细胞时可作为细胞的保护剂，在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶会导致细胞内发生机械损伤引起细胞死亡，如向培养液加入甘油，可使冰点降低，低温中能减少冰晶的形成，故在低温下对细胞进行分离时，样本密度分离液混合体系中的甘油可使细胞冰点降低，维持细胞的正常形态，减少细胞死亡，同时甘油对细胞无毒，可作为细胞分离液的介质，经研究发现6%~11%的甘油在乙醇水溶液中能产生较好的密度梯度，且相比聚蔗糖，在相同密度下，粘度较小，可加快细胞沉降速度，同时不会使细胞特别是红细胞聚集成细胞团后沉淀，故能使样品中细胞根据自身密度自然沉降分层，这样就只有病变的细胞和自身比重较大的细胞才能下降至样本密度分离液底部；同时上述分离液混合体系中含有氯化钠，氯化钠水溶液是一种电解质补充液。钠和氯是机体重要的电解质，主要存在于细胞外液，对维持正常的血液和细胞外液的容量和透压起着非常重要的作用。其中3％～5％的氯化钠溶液能使溶液具有较高的渗透压，可使样本中细胞失水而缩小，再结合混合体系中2%~4%的无水乙醇溶液中乙醇可提高细胞膜的通透性，故可增快细胞失水的速度，从而增大样本密度分离液中细胞的有效密度，确保在较短的制片时间内就能增大细胞的有效密度，加快细胞的自然下沉；茶皂素是由茶树种子中提取出来的一类醣甙化合物，是一种性能良好的天然表面活性剂，0.4%~0.7%的茶皂素与上述混合体系混合后对人的红细胞有破坏作用，使红细胞产生溶血现象，同时又不会破坏其它有核细胞，这样即使有红细胞下降至样本密度分离液中，也会因为混合体系茶皂素的存在而发生溶血反应，变成细胞碎片从而密度减轻不会下降至试管底部与有诊断意义的细胞混合；同时混合体系中用到的双蒸水是重蒸水的一种，是将经过一次蒸馏后的水，再次蒸馏所得到的水，相比普通的蒸馏水具有更高的纯度，可彻底避免将杂菌及杂质引入混合
体系中干扰细胞样本，从而最终通过样本密度分离液混合体系中各种组分的相互作用采集
到足够多且没有红细胞杂质的具诊断意义的细胞。
作为优选，所述样本密度分离液中甘油的质量百分比为8.7％～10.8％。
采用上述方案，经研究发现，采用上述含量的甘油，可保证整个混合体系保证在最好的密度梯度，从而保证诊断病理学细胞能沉入到试管底部。
具体实施方式
以下通过具体的实施方式，进一步阐述本发明。
一种用于液基细胞制片的样本密度分离液，其特征在于，以质量百分比计，所述样本密度分离液包含以下组分：甘油6%~11%；无水乙醇2%~4%；氯化钠3%~5%；蒸馏水79.6%~89.3%；茶皂素0.4%~0.7%。
实施例1本发明的一种用于液基细胞制片的样本密度分离液配制方法为：甘油9%；
无水乙醇3%；氯化钠4%；蒸馏水83.4%；茶皂素0.6%，让上述各组分均匀搅拌溶解即可。
技术特征：
技术总结
本发明公开了一种用于液基细胞制片的样本密度分离液，以质量百分比计，所述样本密度分离液包含以下组分：甘油6%~11%；无水乙醇2%~4%；氯化钠3%~5%；蒸馏水79.6%~89.3%；茶皂素0.4%~0.7%。该样本密度分离液能使有诊断意义的细胞自然更快沉降的同时减少红细胞及炎症细胞沉降干扰，从而使镜检片具有更加清晰的镜检视野背景和良好的细胞染色效果，可广泛适用于各种妇科及非妇科等脱落细胞学标本前置处理以及手动、半自动或全自动液基细胞制片过程。
技术研发人员：不公告发明人
受保护的技术使用者：武汉宏强医疗器械有限公司
技术研发日：2017.08.08
技术公布日：2019.02.26
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